GSTP1(GSTπ)是人体内谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的一种重要的活性亚型,因其首先在人体胎盘(placenta)中被克隆而得名。GSTP1在多种肿瘤组织细胞和转化的细胞株中丰度极高,且与肿瘤细胞的耐药性密切相关。对GSTP1的早期研究集中于分子空间结构及其多态性和催化活性与上述人类疾病的关系,是目前所有人类GSTs中研究最为广泛和深入的一种亚型。GSTP1属于机体内源性蛋白,不会引起免疫原反应,在维持细胞的正常机能中发挥着重要作用,也是一种具有临床应用价值的抗氧化剂。　　 本实验室前期实验研究发现GSTP1在LPS引起的炎症中具有负向调控的功能,通过下调相关的信号通路减少炎症因子的过量产生。在小鼠巨噬样细胞株RAW264.7中,LPS刺激能上调内源性GSTP1的Mrna转录水平和蛋白表达水平。在细胞内通过瞬时转染和稳定转染的手段过表达GSTP1,过表达的GSTP1以剂量和时间依赖性地抑制了LPS激活的MAPKs,包括ERK、JNK和p38,以及NF-Κb信号通路。此外还发现,通过抑制上游的信号通路,GSTP1抑制了TNF-α和-氧化氮(NO)的合成和释放。并发现外源性的GSTP1蛋白可以抑制LPS刺激Inos与COX-2的大量表达,动物模型上的结果表明,通过腹腔注射GSTP1蛋白可以有效地抑制全身炎性反应。有文献报道GSTP1不仅作为胞内酶在细胞中发挥作用,GSTP1作为胞内主要的Ⅱ期代谢酶类可以存在于细胞外,这表明它可以进行跨膜转运。在本课题中,就是对GSTP1蛋白的入胞机制进行具体研究,发现外源重组的GSTP1以跨膜进入RAW264.7细胞本实验中,我们通过免疫印迹与流式细胞术观察到,培养液中添加的GSTP1蛋白可以进入小鼠巨噬样细胞株RAW264.7细胞和人胚肾细胞株293细胞,这提示我们胞外的GSTP1蛋白可以转运至胞内在胞浆中发挥作用。实验结果表明外源的GSTP1的入胞随浓度的增加而提高,无血清培养比有血清培养入胞效率高。在具体的入胞机制研究中,应用各种内吞机制剂,发现能抑制网格蛋白介导的内吞作用的氯丙嗪对GSTP1入胞基本没有影响,细胞松弛素D是肌动蛋白延伸的抑制剂,因而能抑制细胞的吞噬作用和巨胞饮作用,但甲基-β-环糊精能抑制脂筏途径,在该种药物处理后,GSTP1的入胞明显受到抑制,说明GSTP1以脂筏介导的方式进入RAW264.7细胞我们发现,GSTP1以脂筏介导的方式进入RAW264.7细胞,并具有温度和能量依赖性。　　 综上,我们可以通过增加外源性的GSTP1蛋白来提高胞内GSTP1的水平,从而有效抑制与急性炎症反应相关的信号通路的活化,为治疗全身及局部炎性反应综合症提供了一条新策略,并且该研究为GSTP1蛋白作为直接使用的药物在抗肿瘤、抗炎、抗氧化等领域的应用提供了实验基础。