神经营养因子对食管癌细胞核表达p75NTR的影响

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目的探讨神经生长因子对食管癌细胞核表达p75NTR的影响。方法采用有限稀释法从Eca109细胞中分选出圆形和梭形单细胞克隆;采用无血清悬浮培养Eca109细胞获得细胞球细胞;贴壁的Eca109细胞分别在含血清和不含血清培养基中培养48h。分别采用免疫荧光细胞化学技术检测NGF的表达定位;免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中NGF的表达定位;采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription–polymerase chain reaction,RT-PCR)技术和免疫印迹法,检测NGF在上述细胞中m RNA水平和蛋白水平的表达;用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测NGF在上述处理细胞的分泌情况。免疫荧光细胞化学技术检测加入NGF前后食管癌细胞p75NTR的表达变化,干细胞相关因子Itgα6、Itgβ4、Itgβ1和CD71的表达及定位。结果在食管癌组织细胞、Eca109细胞中均能检测到NGF的m RNA水平和蛋白水平的表达,其中NGF在细胞球细胞中的m RNA水平和蛋白水平的表达量最高。Eca109细胞在无血清培养条件下能够分泌NGF,且明显高于含血清培养基中细胞的分泌量。NGF处理之后,Eca109细胞和细胞球细胞中p75NTR核阳性率增加。并且Itgα6、Itgβ4和Itgβ1在细胞球细胞中的表达量明显增高,与p75NTR核阳性率增加一致。结论NGF可能在维持食管鳞状细胞癌干细胞特性中发挥了重要作用。
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