大豆根瘤内拮抗胞囊线虫细菌筛选及活性菌株初步研究

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2007年6月~2008年9月,从辽宁、吉林、黑龙江、河北、山西、重庆、江西、甘肃、江苏、广东、湖北、陕西、山东等省市的八十一个生态区的不同地块采集土样496份,采用土壤诱集法,诱集根瘤并分离纯化大豆根瘤内生细菌518株,从中筛选拮抗大豆胞囊线虫J2的生防菌株并调查研究了其中辽宁省根瘤菌资源的抗逆性,同时对生防菌株进行鉴定、并研究其对大豆胞囊线虫的孵化和趋性的影响、摇瓶发酵培养基的优化和温室盆栽防效。结果如下:1.通过菌悬液初筛和摇瓶发酵复筛,筛选得到两株杀线活性较强的根瘤内生细菌Sneb183和Sneb241,用两株菌的发酵液处理二龄幼虫72h,致死率分别达到82.99%和70.10%。通过16SrDNA序列分析与表型特征相互补充的鉴定方法,鉴定菌株Sneb183为费氏中华根瘤菌(Sinarhizobium fredii),菌株Sneb241为大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)。2.通过研究生防根瘤菌对大豆胞囊线虫趋性和孵化的影响发现,尽管两株菌的发酵液稀释液均能强烈抑制胞囊孵化,但在根系分泌物的作用下,只有Sneb183发酵液可有效抑制大豆胞囊线虫的孵化,Sneb241发酵液则与根系分泌物协同作用,强烈的促进了胞囊的孵化。Sneb183发酵液与Sneb241发酵液处理后的离体根均可趋避大豆胞囊线虫的二龄幼虫,但Sneb183的趋避作用要强于Sneb241。故试验最终确定Sneb183为目的生防菌株。3.从菌体生长和杀线虫毒力两方面对菌株Sneb183的摇瓶发酵培养基进行优化。结果表明:菌体生长与菌株产杀线虫代谢产物对营养的要求不同,试验以杀线虫活性高低为判断标准,最终选择摇瓶发酵培养基的最佳营养组合为:甘露醇1.5%,酵母粉0.3%,K2HPO4 0.05%,Mg2SO4 0.005%,NaCl 0.01%,CaCl2 0.005%。因初生代谢产物的产生与菌体的生长平行,故可判断杀线虫活性成分为根瘤菌Sneb183的次生代谢产物。4.在灭菌土壤中,Sneb183发酵液原液和其5倍稀释液对大豆胞囊线虫的防效为47.92%和41.67%。Snebl83发酵液稀释液对大豆幼苗具有促生作用。5.大豆根瘤菌在辽宁地区分布广泛,其中,慢生型根瘤菌为辽宁地区的优势种群,同时分布有抗逆性较强的快生型根瘤菌。菌株的抗逆性因区域地理环境的差异而具有多样性并且菌株均不耐氨。
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