目的:通过研究壮骨止痛方对体外培养BALB/c小鼠脾淋巴细胞中CD4 + CD25 + Treg与Th17相关细胞因子、特异性RNA及蛋白表达的影响,探讨壮骨止痛方对CD4 + CD25 + Treg/Th17平衡的影响。方法:制备含药血清:采用雌性大鼠去卵巢方法建立骨质疏松模型,分组灌胃3个月后取血分离血清备用;制备BALB/c小鼠脾淋巴细胞,分为6组:假手术组(即空白组)、模型组、戊酸雌二醇阳性对照组、壮骨止痛方高剂量组、壮骨止痛方中剂量组、壮骨止痛方低剂量组,每组6个复孔,加入含药血清培养72h后,收集培养液,ELIS A法检测对TGF-β、IL-17含量的影响,收集细胞,RT-PCR法检测对Foxp3、RORytRNA表达的影响,western-blot法检测对Foxp3、RORγt蛋白表达的影响。结果:1.与模型组相比,阳性对照组、壮骨止痛方低剂量组、壮骨止痛方中剂量组、壮骨止痛方高剂量组细胞培养上清液TGF-β浓度,差异具有显著性意义或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01);细胞培养上清液IL-17浓度有下降趋势,壮骨止痛方中剂量组及阳性对照组较明显,差异具有显著性意义(P<0.05);2.含药血清各组与模型组相比,Foxp3mRNA表达升高,除壮骨止痛方低剂量组(P>0.05)外,差异具有显著性意义(P<0.05);RORyt RNA表达降低,差异具有显著性意义或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01);3.与模型组比较,Foxp3、RORyt蛋白表达均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.与模型组相比,阳性对照组、壮骨止痛方低剂量组、壮骨止痛方中剂量组、壮骨止痛方高剂量组细胞培养上清液TGF-β浓度上调;IL-17浓度有下降趋势,并且对TGF-β浓度调节效果较明显;2.从RNA及蛋白角度,都能证明壮骨止痛方对Treg/Th17细胞比例产生明显作用,对模型组Treg/Th17平衡紊乱的状况有明显改善作用,并且对Treg有一定的药物浓度正相关作用。