正常情况下,环境中多种有害因素,包括电离辐射(ionizing radiation, IR)、紫外线照射(ultraviolet irradiation, UV)和化学致癌剂等都可能导致细胞DNA损伤。随着生物进化,生物界产生了多种DNA修复途径,例如碱基切除修复(base excision repair, BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair, NER)、同源重组(homologous recombination, HR)和非同源末端连接(no n-ho mo logo us end joining, NHEJ)等。DNA损伤修复对维护基因组完整性至关重要。DNA修复异常很可能导致基因组的不稳定性和细胞的恶性转化,进而导致肿瘤的发生。对DNA修复的长期深入研究,为临床肿瘤治疗提供了大量依据。DNA修复机制复杂多样,是科学界的研究热点之-中心体蛋白N1p (ninein-like protein)是我室通过酵母双杂交实验获得的与BRCA1相关的蛋白。多项研究结果表明,Nlp能参与微管生发、纺锤体形成、中心体成熟以及胞质分裂等多种生物学过程。虽然Nlp在细胞周期中发挥重要的调控功能,是有丝分裂进程所必需的。但是它在其他方面的功能还不清楚。本课题的前期工作中,我们用UV照射肺癌细胞系H1299后,发现细胞内Nlp的定位发生明显改变。这提示我们Nlp可能参与UV导致的DNA损伤应答。为了验证该假设,我们通过宿主细胞再活化反应(HCR)和CPDs移除速率检测的方法,发现Nlp能够促进核苷酸切除修复(nucleotide excision repair, NER)通路的活性。为了进一步研究Nlp的功能,我们利用两种细胞系、Nlp转基因小鼠与对照鼠MEF和新生小鼠皮肤分别进行了UV照射后的细胞活性、克隆形成、流式凋亡以及原位凋亡检测,发现Nlp具有保护细胞抵抗紫外线辐射引起的细胞凋亡的功能。为了探索其相关机制,我们通过UV局部照射的方法发现UV照射后Nlp定位到DNA损伤位点上。之后,通过核蛋白抽提、western blotting、co-IP、GST pull-down等方法,发现UV照射可导致Nlp向细胞核内转运。Nlp的入核受NPM1调控,且与p53无关。Nlp的C末端(1030-1382)介导了其与NPM1相互作用及其入核。另外,Nlp能够分别与XPA和ERCC1相互作用,并且促进两者结合,从而发挥促进DNA损伤修复的功能。除此之外,鉴于UV辐射与人皮肤癌的发生有明确相关性,我们通过免疫组化的方法,发现人皮肤癌样本中Nlp蛋白表达水平明显低于正常对照组。这揭示了Nlp表达异常很可能参与人类皮肤癌的发生发展过程。综上所述,本研究发现并证明了细胞周期调控蛋白Nlp是核苷酸切除修复(NER)通路中一个新的且重要的成员,从而为了解核苷酸切除修复通路的调控机制提供了新的见解,为肿瘤的治疗提供了新的思路。