干扰Notch信号通道抑制内皮细胞间质转分化的实验研究

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目的:体外建立心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVEC)的实验模型,探讨干扰Notch信号通道对心肌微血管内皮细胞间质转分化的作用。方法:采用体外酶消化法分离培养大鼠CMVEC,通过两次差速贴壁纯化细胞。应用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测细胞表面特异性抗原。构建Notch1RNAi慢病毒。实验分为三组:A:正常对照组;B:低氧培养组;C:低氧+Notch1RNAi组。通过免疫荧光双染法检测CD31和FSP-1的表达,使用RT-qPCR检测Notch1下游基因HES-1的表达以及FSP-1、α-SMA表达。结果:培养出形态为扁平形、短梭形的原代细胞,传代后细胞与原代类似,呈铺路石样生长。经免疫荧光Ⅷ因子及CD31抗体鉴定,符合CMVECs的特征。在低氧条件下,免疫荧光显示部分细胞可呈CD31、FSP-1双阳性染色,但C组较B组阳性率明显下降(P<0.05,n=3)。RT-qPCR示B、C组HES-1、FSP-1、α-SMA基因表达上调(P<0.05,n=3),C组低于B组(P<0.02,n=3)。结论:Notch信号通路参与内皮细胞间质转分化过程,干扰Notch信号通道能抑制内皮细胞间质转分化。
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