超声激活血卟啉致新生SD大鼠心肌细胞凋亡的研究

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目的研究超声激活血卟啉对新生SD大鼠心肌细胞的效应,并初步探讨其相关机制。方法用差速贴壁法培养原代新生SD大鼠心肌细胞,并将其分为四组:超声+血卟啉组,超声组,血卟啉组和对照组。其中超声和超声+血卟啉组均以频率300 kHz,声强1.5 W/cm~2辐照60秒;血卟啉和超声+血卟啉组加入血卟啉时调至终浓度为20μg/ml,注意严格无菌操作。采用MTT法观察各处理因素对细胞的生长抑制情况;流式细胞仪膜联蛋白V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡状况;免疫荧光细胞化学法鉴定细胞及检测Fas/FasL蛋白表达情况。结果MTT法测得24 h抑制率(%)分别为:超声+血卟啉组44.43,超声组35.12,血卟啉组4.11,对照组0;超声+血卟啉组24 h抑制率显著高于其他各组(P<0.05)。流式细胞仪膜联蛋白V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡率(%)分别为:超声+血卟啉组24.21+2.77,超声组18.48+2.70,血卟啉组11.06+2.03,对照组7.71+0.66;超声+血卟啉组细胞早期凋亡率明显高于其他各组(P<0.05)。免疫荧光细胞化学法测定Fas蛋白表达光密度值(OD值)分别为:超声+血卟啉组0.081+0.003,超声组0.061+0.006,血卟啉组0.050+0.004,对照组0.045+0.004;FasL蛋白表达光密度值(OD值)分别为:超声+血卟啉组0.080+0.002,超声组0.062+0.004,血卟啉组0.036+0.005,对照组0.034+0.002。与其他各组相比,免疫荧光细胞化学法测定超声+血卟啉组Fas/FasL蛋白表达光密度值有明显增高(P<0.05)。结论超声激活血卟啉对体外培养新生SD大鼠心肌细胞有明显的促凋亡效应,其可能与Fas/FasL蛋白表达增高有关。
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