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目的:
通过检测行体外受精-胚胎移植的多囊卵巢综合征患者(polycysticovarysyndromePCOS)及正常月经周期患者卵巢颗粒细胞上血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)、血管紧张素Ⅱ受体2(AT2)、血管紧张素1-7受体(MAS)表达的差异，探讨其是否参与PCOS发病;通过使用不同浓度的AngⅡ、Ang1-7作用于卵巢颗粒细胞，了解其对颗粒细胞增殖分泌功能的影响，探讨其在局部卵巢组织中的生理病理作用。
方法:
1、人卵巢黄素化颗粒细胞收集取自2011年11月-2012年6月在河北医科大学第二医院生殖医学中心行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵泡穿刺术患者21例，年龄24～38岁。患者均为长周期促排卵方案者，定期监测卵泡发育，当优势卵泡直径＞17mm时，肌肉注射10000IUhCG，于注射34-36h后，B超下经阴道穿刺卵泡采集卵母细胞，同时收集卵泡液。
对照组为因输卵管不通或者因男方因素不孕的女性11例，这些患者平素月经规则，排卵功能及盆腔超声检查无异常，均排除其他的内分泌疾病，行IVF-ET前3个月内无激素类药物应用史，无心、肝、肾等疾病病史;
实验组为多囊卵巢综合征患者10例，PCOS的诊断参照2003年鹿特丹标准[1]:①稀发排卵或不排卵;②高雄激素血症表现;③卵巢多囊样改变（一侧或双侧卵巢直径2-9mm的卵泡＞12个，或（和）卵巢体积≥10ml)，以上三项中具备两项即可诊断。同时排除肾上腺或垂体等其他内分泌疾病，且患者近3个月内无激素类药物应用史，无心、肝、肾疾病史。
2、体外培养正常月经周期及PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞72小时，RT-PCR检测颗粒细胞AT1、AT2、MASmRNA水平的表达;
3、以10-10～10-5mmol/L浓度的AngⅡ、Ang1-7作用于人卵巢黄素化颗粒细胞24、48、27小时，四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法测OD值，检测AngⅡ、Ang1-7对颗粒细胞增殖功能的影响;
4、以10-6mmol/L浓度的AngⅡ、Ang1-7作用于人卵巢黄素化颗粒细胞24、48、72小时，化学发光法检测颗粒细胞上清液中雌激素(E2)、孕激素(P)的浓度，间接了解AngⅡ、Ang1-7对颗粒细胞功能的影响。
结果:
1、人卵巢黄素化颗粒细胞体外生长情况:细胞成活率达90％以上。细胞培养24h内贴壁、增殖;培养2d后明显增殖，2-5d时处于分裂高峰;6-7d逐渐变形、退化。培养第3d经HE染色可见细胞核大、圆，细胞质透光性好、富含颗粒及空泡，核染深蓝色，细胞质呈淡红色。
2、RT-PCR法检测AT1、AT2、MASmRNA的结果
2.1、AT1mRNA的表达
正常月经周期患者卵巢黄素化颗粒细胞与PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞中均有AT1mRNA表达，AT1mRNA表达的结果分别为2.895±0.9625、5.266701±1.7663，PCOS患者组AT1mRNA明显高于正常月经周期组，且差异有统计学意义(P＜0.05)。
2.2、AT2mRNA的表达
正常月经周期患者卵巢黄素化颗粒细胞与PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞中均有AT2mRNA表达，AT1mRNA表达的结果分别为1.8662±0.669、5.9741±2.1063，PCOS患者组AT2mRNA明显高于正常月经周期组，且差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.3、MASmRNA的表达
正常月经周期患者卵巢黄素化颗粒细胞与PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞中均有MASmRNA表达，MASmRNA表达的结果分别为0.5337±0.1974、1.4830±0.2593，PCOS患者组MASmRNA明显高于正常月经周期组，且差异有统计学意义(P＜0.05)。
3、MTT检测结果
3.1、AngⅡ作用于颗粒细胞后MTT检测结果
10-10～10-5mmol/L的AngⅡ作用24、48、72小时，其吸光度(OD)均较对照组低，且差异有统计学意义(P＜0.05)
10-9～10-6mmol/L浓度组随着浓度的增加AngⅡ抑制细胞增殖的作用逐渐增强，以10-6mmol/L时抑制作用最强;
3.2、Ang1-7作用于颗粒细胞后MTT检测结果:
10-10～10-5mmol/L的Ang1-7作用于颗粒细胞24、48、72小时，OD值均较对照组低，且差异有统计学意义(P＜0.05);
10-9～10-6mmol/L浓度组随着浓度的增加Ang1-7抑制细胞增殖的作用逐渐增强，以10-6mmol/L时抑制作用最强;
3.3、随时间延长MTT检测结果
随AngⅡ、Ang1-7作用时间延长（24、48、72小时），OD值逐渐增加，且差异有统计学意义(P＜0.05);
4、AngⅡ、Ang1-7作用于颗粒细胞后上清液E2、P浓度:
4.1、与对照组相比，AngⅡ、Ang1-7组作用24、48、72小时后，颗粒细胞上清液中E2浓度增加，且差异有统计学意义(P＜0.05)。两药物间E2浓度无明显差异(P＞0.05）;
4.2、与对照组相比，AngⅡ、Ang1-7组作用24、48、72小时后，颗粒细胞上清液中P浓度无明显变化(P＞0.05)。两药物间P浓度也无明显差异（P＞0.05）;
4.3、随作用时间延长(24、48、72小时)，各组E2、P均增加，且差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论:
1、密度梯度离心法体外培养人卵巢颗粒细胞成活率较高;
2、PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞上AT1、AT2、MAS的分子表达更强，其可能参与了PCOS的病理过程;
3、生理剂量的AngⅡ(10-10mmol/L)抑制细胞生长，且随浓度的增加抑制作用逐渐增强，10-6mmol/L浓度时抑制作用最强;生理剂量的Ang1-7抑制细胞生长，且随浓度的增加抑制作用逐渐增强，10-6mmol/L浓度时抑制作用最强;随药物作用细胞时间增加（24、48、72小时）细胞逐渐增殖;
4、AngⅡ、Ang1-7促进卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌，但对孕激素无明显影响;随作用时间延长（24、48、72小时）颗粒细胞分泌的雌孕激素水平逐渐增加。