【摘 要】
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目的:椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration,IDD)引起的腰背痛在现代社会中非常普遍,造成了沉重的社会负担和患者生活质量的下降。IDD是一个多因素介导的病理学过程,其中压力刺激的髓核细胞损伤是该过程的关键一环。研究发现环状RNA(circular RNA,circRNA)作为一类内源性非编码RNA,在多种疾病的发病机制中发挥着重要作用。然而,circRNA与
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目的:椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration,IDD)引起的腰背痛在现代社会中非常普遍,造成了沉重的社会负担和患者生活质量的下降。IDD是一个多因素介导的病理学过程,其中压力刺激的髓核细胞损伤是该过程的关键一环。研究发现环状RNA(circular RNA,circRNA)作为一类内源性非编码RNA,在多种疾病的发病机制中发挥着重要作用。然而,circRNA与压力诱导髓核细胞损伤之间的关系尚不明确。本课题旨在探究压力刺激下人类髓核细胞中circRNA的差异性表达谱,并通过基因生物信息学进一步分析其潜在的生物学功能和机制。方法:利用Trizol法分别提取三例对照髓核细胞样本和三例压力处理的髓核细胞样本的总RNA,通过Nano Drop ND-1000测定RNA的纯度和浓度。利用基因芯片技术筛选出压力刺激下差异表达的circRNA。采用qRT-PCR技术验证差异表达的circRNA在对照髓核细胞和压力刺激的髓核细胞中的表达情况。使用生物信息学数据库预测分析差异表达circRNA上的mi RNA结合位点,并使用荧光素酶报告基因实验检测分析circRNA对其潜在靶向结合的mi RNA的直接作用。结果:本课题成功构建了压力刺激下人类髓核细胞中circRNA的差异性表达谱。从两组髓核细胞样本中检测出显著差异表达的环状RNA共1784个,其中包括差异性上调表达286个,差异性下调表达1498个。从下调表达的circRNA中进一步筛选出部分进行qRT-PCR验证,结果表明与基因芯片检测出的circRNA表达模式一致,其中hsa_circ_0044722下调倍数最为显著。生物信息学分析预测出了hsa_circ_0044722的潜在mi RNA结合位点,同时我们进一步证实了hsa_circ_0044722可直接海绵吸附mi R-34a-5p从而调控靶基因的表达。结论:压力刺激下的椎间盘髓核细胞中circRNA发生了差异性表达变化,其中大部分circRNA因压力刺激而下调。显著下调的hsa_circ_0044722可作为mi RNA海绵与mi R-34a-5p相结合。circRNA在压力诱导的髓核细胞损伤中起着重要作用。
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