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猪高热病是2006年于中国南方许多省份爆发的猪烈性传染病,目前已通过初步研究证实高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)为猪高热病的主要致病原。自1991年首次发现以来,PRRSV作为养猪业的重要病原得到了动物医学、病毒学等学界的极大关注和深入研究。PRRSV为成套病毒目(Nidovirales),动脉炎病毒科(Arteriviridae)成员;病毒基因组由长约15kb的单链RNA分子所组成。病毒基因组包含9个开放阅读框(ORF),其中ORFla、1b编码病毒复制相关的非结构蛋白前体寡聚蛋白,而ORF2-7则编码病毒的各结构蛋白。根据氨基酸序列差异和血清学实验结果,PRRSV被分为欧洲型和美洲型两个亚型,两个亚型间核苷酸同源性约为80%;在两个亚型内,不同分离株之间也有不同程度的差异。在病毒蛋白中,非结构蛋白nsp2显示了最大程度的变异度;在不同分离株中,nsp2氨基酸序列非必须区域的变异度最高可达60%,鉴于分离株之间存在着毒力的差异,故推测nsp2蛋白可能与病毒的毒力有关。
论文第一章引言部分首先详细介绍了猪高热病的病情和病理特征,并概括了猪高热病病原确定为高致病性PRRSV的发现经过。关于PRRSV的各方面的研究进展在引言第二部分也得到了详细介绍,为今后开展PRRSV研究提供了重要的参考材料。另外,反向遗传学技术在PRRSV研究中的应用被单独在引言最后部分作了系统性介绍。
论文第二章主要描述了笔者在猪高热病爆发后寻找其病原过程中所做的工作:通过PCR方法确认了高致病性PRRSV为病原,并发现了其特异性的nsp2蛋白的氨基酸缺失。笔者也表达了PRRSV的N和nsp2蛋白抗原区,制备了抗体。
论文第三章记录了笔者应用反向遗传学技术将上述发现的高致病性PRRSV的nsp2蛋白的缺失突变引入感染性克隆pCMV-S-P129的过程,通过实验我们发现缺失突变病毒生长复制较原始病毒减慢。
论文最后一章为作者正在进行的动物攻毒实验的简要介绍。
综上所述,作为对PRRSV nsp2蛋白与病毒致病性的关系的原创性基础研究,本论文不仅具有很强的理论意义,对于猪高热病的防治也具备一定参考价值。