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目的本课题采用利血平诱导的急性抑郁大鼠模型,研究电针刺激对抑郁症的治疗作用及可能的作用机制。旨在阐明电针刺激通过激活BDNF/TrkB信号通路,促进脑内神经发生发挥治疗抑郁症的作用。研究为传统疗法电针刺激治疗抑郁症的机制探索提供新的方向,为临床治疗提供思路和理论依据。方法1.连续腹腔注射利血平(Respine,RESP,4 mg/kg/d,i.p.3 d)建立大鼠急性抑郁模型,通过悬尾、强迫游泳、旷场等行为学实验,评价利血平急性抑郁大鼠模型建立是否成功;电针(Electro-acupuncture,EA)连续治疗7 d(EA预处理3 d后给予利血平,最后一次EA后30 min进行行为学测试),观察EA是否改善急性抑郁大鼠的抑郁样行为,经典抗抑郁药物—氟西汀(Fluoxetine,FLXT,20 mg/kg/d,3 d)治疗组为阳性对照组,同体积的生理盐水作为治疗的阴性对照。2.采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU,100 mg/kg i.p.,3 d)掺入法观察大鼠海马齿状回区(Dentate gyrus,DG)神经干细胞(Neural stem cell,NSC)增殖的变化,比较给予或不给予EA治疗对抑郁大鼠DG区NSC增殖的影响。3.采用Western blot方法,检测各组大鼠海马中BDNF/TrkB信号通路相关蛋白BDNF、TrkB、p-ERK及p-CREB的表达水平,分析给予EA治疗是否影响抑郁大鼠中这些蛋白的表达。为进一步探讨EA是否通过BDNF/TrkB通路对利血平诱导的抑郁大鼠发挥抗抑郁作用,采用立体定向双侧侧脑室微量注射方法,给予TrkB受体拮抗剂GNF5837(1μg/μL,4μL/侧),观察GNF5837是否改变EA对BDNF/TrkB通路下游蛋白表达水平的影响。4.为探究BDNF/TrkB信号通路是否通过影响NSC增殖参与EA抗抑郁的作用,掺入BrdU后分析GNF5837对EA促NSC增殖效应的影响,同时,评价GNF5837对急性抑郁大鼠的抑郁样行为的影响。结果1.行为学检测结果显示,与正常组(Control)大鼠比较,在悬尾实验中,RESP组大鼠不动时间显著增加,不动的潜伏期显著降低,表现为抑郁样行为;强迫游泳实验中,观察到相似的结果,表明利血平急性抑郁大鼠模型建立成功。与RESP组相比,EA治疗后,大鼠的不动时间显著减少,提示EA治疗有改善抑郁样行为的作用。旷场实验中,与Control组比较,RESP组大鼠的自发活动的总路程和中央区域活动时间明显减少;与RESP组相比,EA(EA+RESP)治疗有效改善并增加了大鼠活动的总路程及中央区域活动时间;阳性对照FLXT治疗组有相似结果,EA治疗组与FLXT对照组无明显差异;结果显示EA治疗可改善抑郁大鼠的活动能力。2.采用BrdU掺入后免疫荧光染色法分析NSC的增殖,结果显示,与Control组相比,RESP模型组大鼠海马DG区BrdU阳性标记NSC数目显著减少,提示RESP模型组中NSC增殖减少;与RESP组相比,EA治疗后,EA+RESP组大鼠DG区NSC的增殖显著增加;FLXT阳性对照治疗组有相似结果,EA+RESP组与FLXT+RESP阳性治疗对照组无明显差异。该结果提示EA具有促NSC增殖的作用。3.Western blot结果表明,与Control组相比,RESP模型组大鼠海马BDNF、TrkB、p-ERK和p-CREB表达水平显著下调;与RESP组相比,EA治疗增加了EA+RESP组BDNF、TrkB、p-ERK和p-CREB表达水平;脑室内预先给予GNF5837,则取消EA刺激下升高的大鼠海马p-ERK和p-CREB表达水平,提示GNF5837抑制了EA的抗抑郁作用;GNF5837+RESP组大鼠海马p-ERK和p-CREB表达水平与RESP组无差异。结果表明GNF5837阻断了EA增加BDNF/TrkB通路蛋白表达水平的作用。4.行为学检测结果显示,在悬尾实验和强迫游泳实验中,与EA+RESP组相比,预先给予GNF5837,可取消EA介导减少的大鼠不动时间,表明GNF5837取消了EA抗抑郁样表现的治疗作用。5.采用BrdU掺入,进一步分析GNF5837对EA促NSC增殖的影响,结果显示,与EA+RESP组相比,GNF5837预处理取消EA治疗的促NSC增殖作用,提示GNF5837拮抗了EA的促增殖作用。结论本研究证明,通过腹腔注射RESP成功建立大鼠急性抑郁模型;给予利血平大鼠EA治疗,可改善RESP大鼠的抑郁样行为。进一步的机制研究发现,EA通过激活BDNF/TrkB信号通路,改善急性抑郁大鼠受损的NSC,发挥抗抑郁治疗效果。因此,EA可能是通过BDNF/TrkB信号通路促进抑郁大鼠NSC增殖来发挥治疗急性抑郁症的作用。