目的:通过多中心、随机、双盲、安慰剂对照试验,观察蠲痹汤治疗活动期类风湿关节炎的有效性和安全性;选用人类风湿关节成纤维样滑膜细胞和胶原诱导性关节炎小鼠模型进行体内外验证,探索蠲痹汤及有效成分抗关节炎的可能机制,为蠲痹汤的推广与应用提供临床和理论依据。方法:1.蠲痹汤治疗类风湿关节炎的有效性和安全性研究根据多中心、随机、双盲的原则,将符合纳入标准的115例活动期类风湿关节炎(RA)患者分为蠲痹汤组和安慰剂组,两组患者基础用药均为甲氨蝶呤(MTX)。通过12周的临床用药和48周随访,观察两组患者DAS28评分、EULAR评分、CDAI评分、疼痛肿胀关节数、晨僵、SF-36评分、MOS评分、血清炎症指标、中医证候积分、血常规、肝肾功等,评估蠲痹汤治疗类风湿关节炎的有效性和安全性。2.蠲痹汤及有效成分对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞影响的研究选用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)为研究对象,通过研究蠲痹汤及其所含的11种可能具有抗炎作用的中药单体,对TNF-α诱导的MH7A细胞炎症因子和金属基质蛋白酶(MMPs)等基因和蛋白水平的影响,评估蠲痹汤及其有效成分调控滑膜细胞发挥抗炎、抗软骨和骨破坏的作用,通过观察对细胞内信号传导通路的影响,探讨其发挥作用的可能机制。3.蠲痹汤及有效成分对胶原诱导性关节炎小鼠炎症影响的研究建立胶原诱导性关节炎小鼠模型(CIA)和三维彩超(3D-US)检测CIA的技术平台,通过关节临床症状评分、三维彩超评估、病理学评分、Micro-CT骨破坏评分、血清学检测、免疫组化等手段,评估蠲痹汤及有效成分对CIA小鼠关节炎症的影响和其抗炎、抗软骨及骨破坏的作用和可能的机制。结果:1.蠲痹汤可以改善活动期类风湿关节炎患者的临床症状,降低病情活动度药物治疗12周,随访48周发现,蠲痹汤可以有效降低活动期RA患者的DAS28评分,减轻类风湿关节炎病情活动度,提高患者EULAR标准达标比,降低CDAI评分,减少关节疼痛肿胀数目和晨僵时间,提高患者SF-36生活质量评分,改善患者睡眠,降低血清炎症指标,改善患者中医症状,降低中医证候积分,并且安全、可靠,不良反应少。2.蠲痹汤及有效成分抑制TNF-α诱导MH7A细胞炎症因子和MMPs的表达通过CCK-8法筛选合适的药物浓度,通过PCR和ELISA实验发现,蠲痹汤及有效成分紫花前胡甙、紫云英苷可以有效抑制TNF-α诱导MH7A细胞炎症因子(IL-6、IL-8)和MMPs(MMP-1、MMP-3、MMP-13)基因和蛋白水平的表达。Western blot及免疫荧光结果显示,蠲痹汤及紫花前胡甙可以有效的抑制TNF-α诱导的MH7A细胞p38、JNK、NF-κB p65蛋白的磷酸化和NF-κB p65核转位。紫云英苷可以抑制TNF-α诱导的MH7A细胞p38、JNK、AP-1 c-Jun的磷酸化和p-c-Jun核转位。3.蠲痹汤及有效成分改善CIA小鼠的关节炎症,减轻软骨和骨的破坏建立三维彩超评估CIA小鼠的关节炎症的技术平台,发现3D-US可以三维定量的评估小鼠膝、踝关节内部的滑膜炎症和血管变化,3D-US检测结果和病理学评分有较好的相关性,3D-US评估明显优于临床症状评分和Micro-CT骨破坏评分。通过观察CIA小鼠的关节临床症状评分、受累肢体数、足踝肿胀厚度发现,蠲痹汤及有效成分紫花前胡甙、紫云英苷可以改善CIA小鼠关节炎症状、减轻受累肢体数和足踝的肿胀。3D-US评估、病理学评分、Micro-CT骨破坏评分同样显示,蠲痹汤及有效成分紫花前胡甙、紫云英苷可以减轻膝、踝关节的炎症反应、滑膜增生、血管的生成、软骨和骨的破坏。血清检测、免疫组化显示,蠲痹汤及有效成分发挥作用的机制可能与降低血清炎症因子产生,抑制滑膜、软骨细胞MMPs的表达相关。结论:1.蠲痹汤可以有效的降低活动期RA患者的病情活动度,减轻关节炎症状,改善患者的生活质量,同时安全、可靠,不良反应少。2.蠲痹汤及有效成分紫花前胡甙、紫云英苷可以有效的抑制滑膜细胞炎症因子和MMPs的产生,其发挥作用的机制可能和抑制p38、JNK、NF-κB p65、AP-1c-Jun的磷酸化相关。3.蠲痹汤及有效成分紫花前胡甙、紫云英苷可以改善CIA小鼠的关节炎症,减轻关节软骨和骨的破坏,其发挥作用的机制可能与降低血清炎症因子产生,抑制滑膜、软骨的MMPs表达相关。4.3D-US可以活体、无创、三维、定量的评估CIA小鼠膝、踝关节的滑膜炎症和关节内血管的变化,3D-US检测技术可以在CIA小鼠的基础研究中推广。