论文部分内容阅读
目的检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中的表达与相互关系及意义。方法1.实时荧光定量PCR法检测PMS2和GSK-3βmRNA水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞及正常卵巢组织中的表达。2. Western blot免疫印迹法检测PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白水平在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞中的表达。3.免疫组化双染法检测卵巢组织中PMS2和p-GSK-3β的表达。4.分析PMS2与GSK-3βmRNA水平的相关性和PMS2与GSK-3β磷酸化水平(p-GSK-3β/GSK-3β)的相关性。5. MTT法检测LiCl阻断GSK-3β活性后,细胞增殖的改变。结果1. PMS2 mRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的74.59±41.376,1.85±0.369,50.16±30.316,1.65±0.901,3.04±0.887倍;GSK-3βmRNA在A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3细胞的表达相对量分别为正常卵巢组织的54.27±32.137,0.47±0.010,92.04±30.316,17.44±2.621,5.08±0.256倍。2. PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达。3. PMS2和GSK-3βmRNA在人卵巢癌细胞株和正常卵巢组织中的表达呈正相关性,R=0.853,P<0.001;PMS2与p-GSK-3β呈负相关,R=-0.402, P<0.001。4.不同浓度的LiCl作用于卵巢癌细胞株后,细胞增殖被抑制,且抑制率呈LiCl的浓度依赖性。结论PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中均有表达,PMS2的表达可能受GSK-3β的调控。目的检测GSK-3β能否稳定PMS2的表达。方法1. Western blot免疫印迹法检测不同浓度LiCl作用于卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3后,PMS2,GSK-3β和p-GSK-3β蛋白水平的改变。2. LiCl处理细胞后,用放线菌酮抑制蛋白合成,检测PMS2蛋白的半衰期改变。3.免疫共沉淀的方法检测PMS2和GSK-3β在自然状态下是否结合。结果1. LiCl抑制GSK-3β活性后,卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3中PMS2的表达明显下降,并呈LiCl剂量依赖性。2. LiCl抑制GSK-3β活性后,PMS2的半衰期约为2h,而对照组PMS2在2.5h内相对稳定。3.用GSK-3β抗体沉淀下来的免疫复合物中可以检测到PMS2的存在;相应用PMS2抗体沉淀下来的免疫复合物中也可检测到GSK-3β的存在。结论GSK-3β可与PMS2相结合并稳定PMS2的表达。目的探讨LPS在诱导肿瘤细胞增殖与迁移中的作用及作用机制,并明确PMS2在其中的作用。方法1. MTT法检测不同浓度LPS作用于卵巢癌细胞株A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3,对细胞增殖的影响。2. Transwell小室法检测LPS对肿瘤细胞迁移的影响。3. Western blot法检测LPS刺激后,TLR4,MyD88,PMS2,GSK-3β等基因蛋白水平的改变。结果1. LPS刺激可以诱导人卵巢癌细胞A2780,Angle,NIH:OVCAR-3,Caov3,SKOV3的增殖,并且这种作用可以被siTLR4所抑制。2. LPS促进人卵巢癌细胞A2780,Angle,Caov3,SKOV3的迁移,并且这种作用可以被siTLR4部分抑制。3. LPS刺激细胞后,TLR4,MyD88,NFκB的表达增强,而PMS2,IκB的表达下降。结论PMS2可能参与LPS诱导的肿瘤细胞增殖和迁移。