Hes1在SD大鼠脊髓发育不同阶段及成年大鼠脊髓损伤后的表达规律研究

来源 :蚌埠医学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zc81065442
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目的:(1)观察Hesl在不同发育阶段SD大鼠脊髓中的表达规律。(2)观察Hes1在成年SD大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化规律。(3)通过免疫荧光组织化学技术观察Hes1阳性表达细胞类型。方法:(1)建立从胚胎期到成年期不同发育阶段SD大鼠脊髓组织标本库:包括E15.5d(胚胎期15.5天),E18.5d (胚胎期18.5天),P0d(刚出生),P3d(出生3天),P7d(出生7天),P2w(出生2周),P4w(出生4周),Adult(成年)等不同发育时期的SD大鼠脊髓。(2)使用Allen法制作大鼠急性SCI模型,并分别于损伤后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d取脊髓组织。(3)RT-PCR检测不同发育阶段及成年大鼠脊髓损伤后不同时间Hes1mRNA的表达变化。(4)western blot检测不同发育阶段及损伤后不同时间大鼠脊髓中Hes1蛋白的表达变化。(5)使用免疫荧光组织化学技术观察Hes1在大鼠脊髓正常发育不同阶段的表达情况及阳性细胞表达类型。结果:(1)Hesl在所选取的不同发育阶段的脊髓中均有表达,在大鼠脊髓发育过程中(E15.5、E18.5、P0、P3、P7、P2W)Hes1在mRNA水平和蛋白水平的表达显著高于成年期(P<0.01)(2)成年大鼠脊髓损伤后3-5天Hes1的表达在mRNA水平和蛋白水平都有显著性升高(P<0.05)。(3)免疫荧光组织化学染色结果显示,GFAP阳性细胞在E15.5d的大鼠脊髓中没有观察到,而在P0、P7、P2w期脊髓中出现;MBP阳性细胞在胚胎期没有观察到,出现在P7、P2W;β-Tubulin阳性细胞在E15.5、P0、P7、P2W都能检测到;Nestin阳性细胞出现在胚胎期,出生后(P7、P2W)检测阴性。(4)Hes1主要在细胞核中表达,在GFAP、MBP、β-Tubulin、Nestin阳性细胞中都有表达。结论:(1)Hesl在所选取的各个发育时期SD大鼠脊髓中均表达,Hesl在SD大鼠脊髓发育期表达较高。(2)大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化发育呈现一定时空分布规律,向神经元方向分化早于胶质细胞的发生。(3)Hes1在神经干细胞、成熟神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞中都有表达。(4)成功建立成年大鼠脊髓损伤模型,并检测到脊髓损伤后Hes1的表达水平增高。
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