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目的:通过基因工程技术获得重组幽门螺杆菌VacA毒性片段蛋白,为制备Hp感染的诊断试剂和研制疫苗提供有效抗原。以重组蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体间接ELISA法，为制备检测Hp毒株感染的试剂盒奠定基础。方法：通过BLAST比较国内Hp代表株的vacA基因毒性亚单位，找出高度同源性片段，按标准株AF050320 vacA基因序列设计引物，利用PCR技术从Hp基因组中扩增vacA基因毒性片段（v），插入原核表达载体pQE30上，转化表达受体菌DH5α,SDS-PAGE分析表达情况，Western blot检测其抗原性。Ni-NTA2+树脂纯化后，用重组蛋白免疫兔，Helico Blot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。并以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清VacA抗体间接ELISA法，以Helico Blot试剂盒为标准，确定该方法的特异性与敏感性。结果： 1.重组表达质粒pQE30-V构建成功,序列分析所得序列完整，与文献报道的各中国菌株相比有高度同源性，而与标准株AF361700比较有1 .5%的bp及一个氨基酸发生变异；2. SDS-PAGE显示表达产<WP=8>物相对分子量为27 000，表达量为25%；3. Western blot显示该蛋白可被VacA(+)Hp血清所识别；4.SDS-PAGE分析表达蛋白既存在细菌裂解液上清中，又存在包涵体中,经Ni2+-NTA树脂纯化后，可得到纯度93%以上的蛋白质；5.通过Helico Blot试剂盒检测纯化蛋白的兔抗血清，证实有良好的免疫原性；6.用重组蛋白建立检测血清VacA抗体的间接ELISA法，敏感性与特异性分别是93.1%和92.5%。结论：Hp vacA基因毒性片段表达成功，获得高纯度重组蛋白并具有良好的抗原性与免疫原性，为研制疫苗和制备诊断VacA(+)株感染试剂盒提供了可靠材料。以重组蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体的间接ELISA法，敏感性、特异性高，为制备商品化的试剂盒奠定了基础。