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目的：探讨SHP-2在去血清诱导心肌细胞凋亡中的作用。并在HEK293细胞内扩增Ad-GFP，包装Ad-GFP-SHP-2，Ad-GFP-SHP-2E76A重组腺病毒。
方法：采用能够去除内毒素的小量质粒抽提盒分别纯化载体；PacI酶切线性化；Lipofectamine2000介导线性化载体转染入HEK293细胞进行包装；从病变的HEK293细胞分离重组腺病毒。利用重组的腺病毒感染乳鼠心肌细胞，并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。用PI/Hoechest33258双染检测乳鼠心肌细胞的增殖及凋亡。采用免疫印记法检测在乳鼠心肌细胞中SHP-2的表达。免疫印记法检测SHP-2对细胞外蛋白激酶1/2(ERK1/2)的影响。
结果：PacI酶切后，琼脂糖凝胶上显示4.5Kb的条带；转染线性化的重组病毒载体入HEK293细胞中，反复冻融HEK293，其上清中含重组腺病毒。当感染乳鼠心肌细胞感染复数为100时，感染效率达到90％以上。用PI/Hoechese33258双染检测表明去血清组细胞的凋亡率显著高于对照组，转染Ad-GFP-SHP-2野生型(WT)组与转染Ad-GFP-SHP-2E76A突变体(EA)组的细胞凋亡率均显著低于转染Ad-GFP空载体对照组。Western blotting结果显示SHP-2在WT组与EA组均过表达。
结论：成功包装重组腺病毒，包装后的腺病毒可高效感染乳鼠心肌细胞。SHP-2可抑制去血清诱导的乳鼠心肌细胞凋亡。