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目的:采用多种生物信息学方法筛选食管鳞状细胞癌(ESCC)中的关键枢纽基因,并检测其中的关键基因IFI44L的生物学功能及分析与临床病理资料的相关性,从而可能为ESCC的诊治提供新的分子标志物,以期为食管鳞状细胞癌的临床诊疗提供新的理论依据。方法:从GEO数据库下载GSE17351,GSE75241,GSE100942,GSE106185这4组基因芯片,使用batch Normalize程序包对合并芯片数据进行批次校正,使用limma、pheatmap程序包筛选ESCC相关差异表达基因;对差异基因进行GO、KEGG功能富集分析;使用STRING构建蛋白互作网络,将差异基因网络可视化,筛选关键枢纽基因。从TCGA数据库下载33种肿瘤基因表达资料和生存资料,使用pan-Cancer相关代码进行泛癌差异分析和免疫细胞相关性分析;使用survival和survminer程序包进行泛癌生存分析以及临床分期相关性分析。使用TIMER在线数据库进行泛癌差异分析对前期分析结果进一步验证;再使用UALCAN网络在线工具进行基因差异表达以及基因与肿瘤分化等级的相关性分析,并验证与患者生存率的关系;使用Oncomine在线数据库(按照基因名、癌症vs正常以及肿瘤类型)筛选出合适的临床标本数据,对ESCC中差异表达基因在ESCC组织与正常食管的表达量数据进行分析。并收集ESCC临床样本180例,En Vision两步法进行免疫组化实验,统计学分析IFI44L、PD-L1以及CD8评分与临床病理资料的相关性以及Kaplan–Meier方法进行生存分析。细胞实验培养EC109食管鳞状细胞癌细胞,si RNA干扰后通过RT-PCR、Western Blot检测细胞中IFI44L m RNA水平以及蛋白水平,划痕实验检测干扰IFI44L后对ESCC细胞迁移的影响。结果:1、GEO数据库分析显示,有60个差异表达基因与ESCC相关。其中,IFI44L、CXCL1、FOXM1、MMP1等31个基因为关键枢纽基因。与正常组织相比,IFI44L在ESCC组织表达水平更高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。2、TCGA数据库泛癌差异分析显示ESCC、多形成性胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肾透明细胞癌以及胃癌中IFI44L的表达水平显著高于正常组织(P<0.05);IFI44L在肾嫌色细胞癌、肺鳞癌和甲状腺癌中表达水平低于正常组织(P<0.05)。在肾乳头状细胞癌、脑低级别胶质瘤以及睾丸癌中,低表达组患者相比(P<0.05),高表达组的生存率较低;而皮肤黑色素瘤中,IFI44L高表达患者的预后较低表达组更佳(P<0.001)。IFI44L表达水平与ESCC患者的生存率无关(P>0.05)。免疫细胞相关性分析显示多种肿瘤中的IFI44L与都免疫细胞有关,其中,IFI44L表达量与ESCC中M0、M1巨噬细胞以及CD4+记忆T细胞这三种免疫细胞具有相关性。TIMER在线数据库和UALCAN在线网络工具同时验证了IFI44L表达水平与多种肿瘤相关包括食管鳞癌(P<0.05)。3、Oncomine数据库检测IFI44L在不同肿瘤中的表达水平有差异,在ESCC中,IFI44L呈高表达。4、免疫组化结果显示,IFI44L在ESCC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.001);临床病理资料相关性分析结果显示IFI44L表达水平与患者的N分期以及肿瘤大小具有显著相关性(P<0.05)。PD-L1、CD8免疫分型,Type I 18例;Type II 41例;Type III 53例;Type IV 2例。IFI44L在不同免疫分型食管鳞癌组织中的表达有差异,且不同免疫分型食管鳞癌组织与年龄以及临床分期具有相关性(p<0.05)。生存分析结果显示,临床病理资料中的性别、T分期、N分期、TNM分期以及肿瘤大小与患者的生存率相关(P<0.05);年龄以及病理分级与患者预后无关。5、荧光定量PCR结果显示,干扰片段si-IFI44L-001的转染效率(89%)高于si-IFI44L-002(65%)和si-IFI44L-003(38%),且干扰效率有显著差异(F=411.016,P=0.000)。蛋白免疫印迹结果显示,干扰组的IFI44L与GADPH灰度值比与NC组相比差异不显著。6、划痕实验结果显示,IFI44L在ESCC中的表达影响了肿瘤细胞的迁移,划痕24h后NC组划痕迁移率最高(61%),干扰IFI44L表达后,ESCC细胞的迁移率下降,说明IFI44L高表达有利于ESCC细胞的转移。结论:1.IFI44L、CXCL1、FOXM1、MMP1等31个基因可能是与食管鳞癌相关的关键枢纽基因,食管鳞癌的发生发展受到多种基因多条通路的调控。2.IFI44L在不同类型肿瘤组织与正常组织中的表达水平存在差异。3.IFI44L表达水平与患者的临床病理资料具有一定的相关性。4.IFI44L在不同免疫分型食管鳞癌组织中的表达水平有差异,且与临床病理资料具有一定相关性。5.干扰IFI44L表达导致细胞迁移率下降,表明IFI44L可能参与食管鳞癌细胞的迁移。