杏花雨对血管性痴呆大鼠行为及其海马Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

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目的:本研究通过观察高纯度银杏黄酮注射制剂杏花雨对缺血再灌注造成的血管性痴呆(VD)大鼠行为及其海马Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨杏花雨对VD大鼠学习记忆能力的影响及可能的作用机制,旨在为该药防治VD提供实验依据。方法:采用双侧颈总动脉缺血再灌注+硝普钠降压法制作VD模型,模型复制成功的VD大鼠随机分为模型组、杏花雨A组、杏花雨B组、金纳多组,另设假手术组。术后第2天开始腹腔注射给药,剂量均为5mL/kg,给药时间共计21天,从给药第3周开始采用Morris水迷宫实验装置及动态图像采集分析系统,由计算机记录各种参数记录。水迷宫实验完成后第2天,各组分别迅速断头取脑组织做HE染色,观察大鼠大脑海马区形态学改变并做免疫组化检测大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:1.水迷宫实验结果:从水迷宫训练第1天起,各组大鼠逃避潜伏期与假手术组比较没有差别(P>0.05);而第2天各组逃避潜伏期均明显缩短,模型组与各治疗组之间有明显差别(P<0.05);第3天开始成绩比较稳定,与模型组比较,杏花雨B与假手术组逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),杏花雨A组与金纳多组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);第4至6天各组与模型组比较均有极显著差异(P<0.01);另外,与金纳多组相比,杏花雨B组逃避潜伏期短,差异有统计学意义(P<0.05),杏花雨A组逃避潜伏期较短,但差异无统计学意义(P>0.05);2.病理学改变:假手术组大鼠海马CA1区未见明显病理变化。模型组大鼠海马CA1区神经元大量变性、死亡,呈现深红色染色,核固缩、深染。杏花雨A、B组、金纳多组与模型组相比,海马CA1区神经元胞体缩小,但形状与正常接近,变性坏死明显较轻。而3组之间以杏花雨B组大鼠海马CA1区形态与假手术组更接近。3.Bcl-2、Bax蛋白表达:假手术组大鼠海马CA1区可见少量Bcl-2,Bax阳性细胞表达,模型组Bcl-2,Bax阳性细胞数量明显增加(P<0.01),其中Bax变化更为显著,Bcl-2/Bax比值较假手术组显著降低(P<0.05);经杏花雨A、B及金纳多治疗后,各治疗组大鼠海马CA1区Bcl-2阳性细胞数均有提高(P<0.05),杏花雨B组有明显提高(P<0.01);大鼠海马CA1区Bax阳性细胞数降低,尤其以杏花雨B组降低明显(P<0.01),Bax与Bcl-2的比值也较模型组明显提高(P<0.05)。结论:1.银杏黄酮可显著改善VD大鼠认知水平,提高学习记忆功能能力,同等剂量下,以杏花雨B效果最佳,杏花雨A与金纳多效果相当。2.通过大鼠大脑组织海马CA1区病理形态学观察,证实银杏黄酮能保护VD大鼠海马区的CA1区神经细胞,以杏花雨B组效果最佳。3.免疫组化结果证实银杏黄酮通过调节VD大鼠海马组织Bcl-2与Bax的蛋白表达,保护海马组织神经元,从而减轻脑缺血再灌注对海马神经元的损伤。其中杏花雨B的这种保护作用最强,杏花雨A与金纳多具有等效性。
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