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目的:探讨小凹蛋白-1（Cav-1）在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用和机制。
方法: (1) 用胰酶消化法对HUVECs原代培养并用形态学及免疫细胞化学法测Ⅷ对其进行鉴定。(2)取2-5代细胞随机分组：细胞外不同浓度钙离子组；CaR处理组（包括精胺组、精胺+Ca2+组、Calhex231+精胺组、Calhex231+精胺+Ca2+组）；Cav-1处理组（包括Filipin+精胺组、Filipin+精胺+Ca2+组）；Cav-1ShRNA处理组（包括Cav-1shRNA处理组：Cav-1ShRNA+精胺组、Cav-1ShRNA+精胺+Ca2+组；空质粒组：Vehicle+精胺+Ca2+组；空白对照(Control)组：未转染+精胺+Ca2+组）。（3）利用转染技术将构建的Cav-1RNA干扰质粒(Cav-1ShRNA)转染入HUVECs中，使HUVECs中的Cav-1低表达。(4)Rt-PCR检测HUVECs中Cav-1、CaR mRNA表达。 (5) 分别采用免疫荧光技术、Western Blot检测HUVECs中CaR、Cav-1蛋白表达、定位、两者在HUVECs中共定位及Cav-1ShRNA转染后的抑制效率(6) 各组分别通过Fura-2/AM负载HUVECs检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]I)；通过NO荧光探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成；并在提供充足底物的条件下检测细胞内内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)可以催化产生的NO量，从而检测eNOS活性。（7）实验数据用均数±标准误表示，组间比较用单因素方差分析，均数间的比较采用t检验或卡方检验。所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。
结果: (1)细胞形态学与免疫细胞化学法测Ⅷ证实所培养的细胞为HUVECs。(2)RT-PCR检测发现HUVECs中有CaR和Cav-1这两种核酸的存在。(3)特异性抗体检测发现HUVECs有CaR和Cav-1的表达，分子量分别约为55kD及22KD,CaR主要分布于细胞膜与细胞浆，Cav-1主要分布于细胞膜，并发现两者有共定位现象。（4）在Fura-2/AM负载HUVECs中[Ca2+]I浓度荧光变化值的测定结果如下：精胺(Spermine)组[Ca2+]I（Δratio=0.3541±0.0186）与细胞外不同浓度钙离子刺激组（Δratio=0）相比明显升高（P<0.05）；与精胺组（Δratio=0.3541±0.0186）相比，Calhex231+精胺组 [Ca2+]I（Δratio=0）明显下降（P<0.05），精胺+Ca2+组（Δratio=0.4591±0.01259）、Filipin+精胺组（Δratio=0.40165±0.0176）、Cav-1 ShRNA+精胺组（Δratio=0.436855±0.0304）的[Ca2+]I均升高（均P<0.05）；与精胺+Ca2+组（Δratio=0.4591±0.01259）相比，Calhex231+精胺+Ca2+组[Ca2+]I（Δratio=0.0318±0.0034）明显下降（P<0.05），Filipin+精胺+Ca2+组（Δratio=0.6286±0.0122）、Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组（Δratio=0.755313±9.1406e-3）的[Ca2+]I均明显升高（P<0.05），而Vehicle+精胺+Ca2+组（Δratio=0.4601±0.02176） [Ca2+]I无差异（P>0.05）。（5）HUVECs中eNOS活性的测定结果如下：与精胺组（1.258333±0.058333）相比，精胺+Ca2+组eNOS活性（2.133333±0.09055）升高（P<0.05），Calhex231+精胺组eNOS活性（0.358333±0.062915）降低（P<0.05），Filipin+精胺组（1.194335±0.032786）和Cav-1 ShRNA+精胺组（1.223678±0.056834）eNOS活性均无差异（P>0.05）；与精胺+Ca2+组（2.133333±0.09055）相比，Calhex231+精胺+Ca2+组（0.670833±0.113116）、Filipin+精胺+Ca2+组（1.41523±0.089673）、Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组（1.306546±0.085632）eNOS活性均降低（均P<0.05），Vehicle+精胺+Ca2+组eNOS活性（2.083233±0.057687）无差异（P>0.05）。（6）在DAF-FM DA负载HUVECs中NO含量的测定结果如下：与精胺组（578.7228±33.5469）相比，精胺+Ca2+组（1729.5841±67.4865）NO含量升高（P<0.05），Calhex231+精胺组NO含量（274.3576±16.1394）降低（P<0.05），Filipin+精胺组（566.2701±12.30874）和Cav-1 ShRNA+精胺组（493.3173±18.14827）NO含量均无差异（P>0.05）；与精胺+Ca2+组（1729.5841±67.4865）相比，Calhex231+精胺+Ca2+组（400.5451±29.9196）、Filipin+精胺+Ca2+组（964.7091±25.31149）、Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组（678.7001±11.84674）eNOS活性均降低（均P<0.05），Vehicle+精胺+Ca2+组eNOS活性（1716.0871±24.27843）无差异（P>0.05）。
结论: (1) HUVECs中钙离子作为CaR的配体未能激活CaR介导的[Ca2+]I，而精胺作为CaR的配体能激活CaR介导[Ca2+]I增加。(2) HUVECs中精胺刺激下介导的[Ca2+]I升高、NO生成及eNOS活性的增加，是通过CaR激活介导的内钙释放和外钙内流共同参与的。(3) HUVECs中Cav-1小凹结构和/或功能受损可能通过增加CaR敏感性或其它钙通道蛋白引起[Ca2+]I进一步增加。(4) HUVECs中Cav-1在CaR介导的NO生成中有促进作用。