论文部分内容阅读
目的:原发性干燥综合征（primary sj?gren’s syndrome,pSS）是一种以泪腺、唾液腺等外分泌腺体受累,具有高度淋巴细胞浸润为特征的弥漫性结缔组织病。临床上主要表现为干燥性角、结膜炎,口腔干燥症,还可累及肺脏、肝脏、肾脏、血液、骨骼肌肉、神经等多个脏器和系统。pSS病因和发病机制未明,研究发现其发病与遗传因素、环境因素、多种免疫细胞及相关细胞因子有关。调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）在pSS发病中的作用是当前研究的热点之一。本研究通过检测原发性干燥综合征患者外周血中调节性B淋巴细胞数目及增殖诱导配体（a proliferation inducing ligand,APRIL）表达水平,分析研究其与免疫球蛋白水平、自身抗体表达、唇腺病理等级以及疾病活动度的相关性,来探讨CD19+CD5+CD1dhi Breg和APRIL在pSS发病发展中的作用,为pSS的诊断和治疗提供新的靶点和思路。方法:1病例选择及分组:选取河北省人民医院风湿免疫科自2015年4月至2015年10月初治的pSS患者30例作为实验组,所有患者均符合2002年修订的pSS国际分类诊断标准,并且排除有其他结缔组织病、颈头面部放疗史、丙肝病毒感染、AIDS、淋巴瘤、移植物抗宿主病、应用抗乙酰胆碱药等。另外,选取年龄、性别与实验组pSS患者匹配的健康志愿者20例为对照组。将pSS患者按照自身抗体的有无、唇腺等级及ESSDAI评分等级进行不同的分组。2实验方法:采用流式细胞术检测表型为CD19+CD5+CD1dhi Breg的百分比;酶联免疫吸附法检测血清中APRIL的表达水平;收集入组患者的基本信息,临床资料,其中临床指标包括WBC、RBC、Plt、Hb、ANA（anti-nuclear antibody,ANA）、ENA抗体谱、类风湿因子（rheumatoid factor,RF）、免疫球蛋白（immune globulin,Ig）、C反应蛋白（C reactive protein,CRP）、血沉（erythrocyte sedimentation rate,ESR）、补体C3（complement3,C3）、C4（complement 4,C4）。3唇腺病理分级:取患者下唇腺病理组织,福尔马林液固定,石蜡包埋,切片,然后进行HE染色。根据Chisholm标准分为IⅣ级。4患者疾病活动指数评估:依据2009年欧洲抗风湿病联盟制定的干燥综合征疾病活动度指数（ESSDAI）对患者疾病活动度进行评估。5采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,计量资料符合正态分布的结果以均数±标准差（xˉ±SD）表示,两组间比较应用t检验;多组样本间均数比较采用单因素方差分析。非正态分布的资料采用中位数（四分位间距）[M（P25,P75）],两组资料比较采用非参数Mann-Whitney U检验。符合正态、方差齐的计量资料采用Pearson相关分析,非正态或方差不齐的计量资料采用Spearman相关分析。结果:1 pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhi Breg及APRIL的表达水平:pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhi Breg占CD19+细胞百分比为5.06±0.69%,较健康对照组2.55±0.54%显著升高（P<0.001）。血清APRIL的表达水平为7.40±2.20ng/ml,较健康对照组1.99±0.44ng/ml显著升高（P<0.001）。2 pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达和APRIL水平与自身抗体的关系:按照自身抗体的存在与否,将pSS患者分为ANA阴性组（7例）、阳性组（23例）;抗SSA阴性组（11例）、阳性组（19例）;抗SSB阴性组（20例）、阳性组（10例）;RF阴性组（19例）、阳性组（11例）。抗SSA抗体阳性、抗SSB抗体阳性组pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达分别为5.44±0.46%和5.59±0.53%,显著高于对应抗体阴性患者的4.41±0.49%和4.79±0.61%（t=-5.70,-3.53;P<0.001）。上述其余各抗体阳性组和阴性组pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达差异无统计学意义（P>0.05）。pSS患者血清APRIL在各抗体阳性组和阴性组的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。3 pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达和APRIL水平与临床指标的关系:pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhi Breg表达与年龄呈负相关（r=-0.43;P<0.05）,与Ig G呈正相关（r=0.44;P<0.05）;血清中APRIL的表达与ESR成正相关（r=0.91;P<0.05）。4 pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达和APRIL水平与唇腺病理分级的关系:实验组pSS患者唇腺病理等级为3级的有8例,唇腺病理等级为4级的有22例,两组CD19+CD5+CD1dhi Breg的表达分别为4.84±0.69%和5.14±0.68%,二者间差异无统计学意义（t=-1.07;P>0.05）;APRIL的表达分别为6.90±1.84ng/ml和7.59±2.34ng/ml,二者间差异亦无统计学意义（t=-0.75;P>0.05）。5 pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达和APRIL水平与ESSDAI的关系:按ESSDAI评分将疾病活动度分为4个等级。0-2分为1级,3-5分为2级,6-8分为3级,9分以上为4级。实验组pSS患者ESSDAI评分分布1级6例,2级19例,3级5例,其CD19+CD5+CD1dhi Breg的表达分别为4.95±0.78%,5.09±0.68%和5.08±0.76%。APRIL的表达水平分别为8.73±3.11ng/ml,6.76±1.69ng/ml和8.27±2.17ng/ml;在疾病活动度不同分级之间CD19+CD5+CD1dhi Breg及APRIL的表达差异均无统计学意义（F=0.10,0.93;P>0.05）。6 pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达和血清APRIL水平的相关性:pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhi Breg与APRIL的表达不具有相关性（r=-0.04;P>0.05）。结论:1 pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhi Breg及APRIL的表达均较健康对照组显著升高,提示CD19+CD5+CD1dhi Breg及血清APRIL参与了pSS的发病过程。2抗SSA抗体阳性和抗SSB抗体阳性pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhi Breg表达高于抗SSA阴性和抗SSB抗体阴性的患者;而且CD19+CD5+CD1dhi Breg表达水平与Ig G水平呈正相关,提示pSS患者CD19+CD5+CD1dhi Breg表达异常与抗SSA和抗SSB抗体的产生有关。3在pSS患者血清APRIL的表达与ESR呈正相关,提示APRIL有可能作为一种体内炎症程度的判定指标。