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目的探讨前列腺癌细胞系氩氦冷冻消融处理后高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1, HMGB1)的释放规律,以及HMGB1诱导异体外周血来源树突状细胞(dendritic cell, DC)凋亡的分子机制。材料和方法前列腺癌细胞系PC-3、DU-145体外培养,氩氦冷冻消融系统(Endocare氩氦冷冻系统,美国,直径1.7mm冷冻器)冻融肿瘤细胞,收集冷冻坏死细胞上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测冷冻处理前后肿瘤细胞上清液中HMGB1的浓度。采集前列腺癌患者新鲜外周血(抗凝),应用Ficoll淋巴细胞分离液,贴壁方法分离出单个核细胞(PBMC),利用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素4(rhIL-4)体外诱导并培养,获取幼稚DC细胞(iDC)。流式细胞仪测定肿瘤细胞冷冻坏死液干预前后的DCs表面TLR-2和TLR-4受体表达率；预先使用TLR-2/TLR-4封闭抗体处理iDC,随后与肿瘤细胞冷冻坏死液在体外适宜培养条件下共培养,流式细胞术测定DCs凋亡率。结果1.PC-3细胞系的ELISA结果：1×10S/ml组、1×106/ml组、1×107/ml组PC-3细胞培养基中HMGB1浓度分别为(65.78±4.57)ng/ml、(96.73±7.64)ng/ml、(137.73±13.37)ng/ml,冷冻消融后上清液中HMGB1浓度为(150.88±6.78)ng/ml、(187.3±5.69)ng/ml、(285.2±27.45)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.01)；2.DU-145细胞系的ELISA结果：1×105/ml组、1×106/ml组、1×107/ml组DU-145细胞培养基中HMGB1浓度分别为(30.44±0.25)ng/ml、(45.78±0.13)ng/m1、(66.82±0.18)ng/ml,冷冻处理后上清液中HMGB1浓度上升至(58.47±0.84)ng/ml、(98.1±4.62)ng/ml、(157.59±32.89)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.流式细胞术检测结果：iDC细胞表面低表达TLR-2、TLR-4(15.4±3.87Vs.5.17±7.22),肿瘤细胞冷冻坏死液刺激后表达率明显升高(45.2±5.58Vs.11.48±7.55),P<0.05。4.流式细胞术(Annexin V-FITC)检测各干预组DCs凋亡率：肿瘤细胞冷冻坏死液与DCs共培养前后,DC细胞凋亡率(5.25±0.46)%Vs.(73.56±0.90)%；TLR-2、TLR-4抗体封闭后,冷冻坏死细胞液诱导DCs凋亡率(38.5±8.61)%Vs.(56.854±7.14)%,(P<0.05)。结论1.流式细胞术检测前列腺癌细胞氩氦冷冻消融后的死亡形式,显示大部分细胞呈碎裂坏死状态。2. ELISA检测冷冻消融前后肿瘤细胞上清液中HMGB1的浓度,结果显示：前列腺癌细胞冷冻消融处理后HMGB1大量释放,肿瘤细胞的数量也是影响HMGB1浓度的因素。3.流式细胞术检测发现,幼稚DC细胞低表达TLR-2和TLR-4受体,前列腺癌细胞冷冻坏死液可明显促进DC细胞表面TLR-2和TLR-4受体表达率。4.肿瘤细胞冷冻坏死液与DCs共培养后诱导DC细胞凋亡；利用TLR-2和TLR-4抗体封闭DC细胞,明显抑制了肿瘤细胞冷冻坏死液诱导的DC细胞凋亡。总之,前列腺癌冷冻消融后,大量肿瘤细胞坏死伴随HMGB1大量释放。HMGB1作为一种内源性的危险信号分子与DC细胞作用,诱导DC细胞凋亡,削弱了冷冻免疫反应。研究发现,HMGB1可能通过TLRs诱导DC细胞凋亡,TLRs抗体可抑制HMGB1诱导DC细胞凋亡的效果,提高冷冻免疫治疗的效果。