鸡源性耐药大肠杆菌中药抑制剂的筛选及对鸡生化免疫指标的影响

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目的:探讨17种中药单味及其复方提取物对多重耐药鸡源性大肠杆菌的影响,筛选出具有明显抑菌作用的耐药抑制剂,为临床治疗耐药大肠杆菌和开发拮抗耐药性的新兽药提供参考。方法:通过大肠杆菌的分离、血清型鉴定及耐药性测定,筛选出对抗生素具有多重耐药的E.coli,用于体外抑菌试验。采用试管倍比稀释法、平板打孔法以及平板稀释法,分别测定中药提取物单味中药和组方中药对多重耐药大肠杆菌菌株和标准株ATCC25922的影响抑菌试验,选择筛选出抑菌作用较好的中药制剂与抑菌效果较差的庆大霉素和氯霉素进行体外增敏试验。然后确定该中药制剂和耐药大肠杆菌在体内使用剂量和攻毒剂量,再在体内进行联合增敏试验。体外试验观察对耐药性大肠杆菌的增敏效果,体内试验记录每组鸡的临床变化,并对死亡鸡只和发病鸡只定时进行剖检,观察病理变化和检菌率。选取健康的60日龄塞北乌骨鸡150只,随机分为5组,分别为阴性对照组(每只鸡腹腔注射生理盐水0.3mL),阳性对照组和试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(此四组每只鸡腹腔注射试验菌液0.3mL)。自感染试验菌第1天起,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ每只鸡每天分别灌服浓缩为2g/ml的中药制剂Ⅰ(CHMⅠ)提取物1.5ml、1ml、0.5ml,连续7d。在感染后第2d平Ⅱ第8d,每组随机抽取4只测定血清生化指标,剖检测定免疫器官指数。结果:1.从五个区县发病的鸡群中分离出15株疑似大肠杆菌的菌株,经病原培养和生化鉴定,共鉴定出3个分离株的血清型,分别是O78、O1和O1+O148,其中O1+O148占优势。用临床分离并鉴定血清型的3株大肠杆菌菌株对20种抗菌药物的耐药性检测中,发现此3种菌株均属多重耐药菌。2.通过对17种单味中药的体外抑菌试验,筛选出有抑菌效果的中药7种,分别是黄连、秦皮、厚朴、苦参、大青叶、穿心莲、黄芩。经过组方后抑菌试验发现CHMⅠ抑菌效果最好;对耐药性大肠杆菌体外具有一定的增敏作用,对质控株ATCC25922无增敏作用。为了满足试验要求,CHMⅠ在体内的使用剂量60日龄塞北乌骨鸡每天每只2g,耐药性大肠杆菌1号菌株每只鸡的接种量以原液的0.3ml(2.4×108CFU)为宜。体内试验表明,CHMⅠ与对耐庆大霉素E.coli的耐药性具有一定的药物逆转作用。3.CHMⅠ对人工感染耐药E.coli后塞北鸟骨鸡生化指标有明显的影响,具体表现为:①CHMⅠ能够促进机体免疫器官胸腺和法氏囊的发育,提高机体免疫力;②能明显降低血清中ALT、AST、GLU的含量,具有保肝利胆作用;③能明显提高血清中ALP, Ca含量,有维持钙平衡的作用;④可以减轻各种因素对肾脏的损害,增进食欲,促进增重和调节微循环。结论:CHMⅠ对鸡源多重耐药性大肠杆菌能起到一定的耐药逆转作用,对动物机体具有一定的免疫保护作用,在临床上具有一定推广价值。
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