基于QCM生物传感器技术的组氨酸标签蛋白芯片和悬浮细胞芯片的研制及其应用

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whlwzn
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
基于石英晶体微天平(Quartz Crystal Microbalance,QCM)技术的生物传感器能够实时、无标记检测生物分子间的相互作用,获取相互作用的亲合性和动力学数据等丰富信息,为研究生物分子相互作用过程,破译相互作用机理等提供了一种强有力的手段,已广泛应用于分子生物学、药物研发、疾病诊断、环境监测和食品安全等多个领域中,并显示出广阔的应用前景。本研究分别制备了基于QCM生物传感器技术的二维、三维组氨酸标签(His tag)蛋白芯片,用于定向、可逆固定组氨酸标签蛋白及蛋白-蛋白相互作用的研究,和悬浮细胞芯片,用于肿瘤细胞表面糖基化及其与凝集素的相互作用动力学的研究,对基于QCM生物传感器技术的生物分子相互作用研究具有重要意义。1)本研究分别制备了二维和三维组氨酸标签(His tag)蛋白芯片用于定向、可逆固定组氨酸标签蛋白,并用于蛋白-蛋白相互作用的研究。利用所制备二维和三维组氨酸标签蛋白芯片,本研究对组氨酸标签俘获法和氨基耦合法所固定蛋白的生物活性,及二维和三维组氨酸标签蛋白芯片的特性(如固定量、所固定蛋白的活性和特异性等)进行了对比,为生物分子相互作用测试中基质表面的选择和生物分子固定方法的优化提供了重要的参考依据。本研究通过改变再生条件可控地使组氨酸标签蛋白芯片表面选择性再生,即在同一块芯片上可选择性地将作用蛋白移去而保留组氨酸标签蛋白以继续进行相互作用研究,或者将作用蛋白和组氨酸标签蛋白全部移去以固定另外一个组氨酸标签蛋白研究其相互作用,使基于组氨酸标签俘获法固定蛋白的相互作用测试更加经济和高效。另外,我们利用所制备的组氨酸标签蛋白芯片对所固定组氨酸标签蛋白与其作用蛋白的相互作用动力学进行了研究,获得了相互作用过程更详细的数据信息,如结合速率常数、解离速率常数及亲和常数等。2)本研究将伴刀豆凝集素(Con A)共价修饰到QCM芯片表面,通过悬浮细胞表面的糖和芯片表面ConA的特异性相互作用将悬浮细胞固定到芯片表面,制备QCM悬浮细胞生物芯片,并对两种悬浮肿瘤细胞(人急性淋巴白血病细胞Jurkat和人急性髓细胞白血病细胞K562)表面糖基化情况及其与凝集素相互作用的动力学进行了研究。本研究所制备的QCM悬浮细胞生物芯片可实时、无标记检测肿瘤细胞表面的糖与蛋白的相互作用并进行相互作用的动力学研究,为细胞表面糖基化研究提供了一个方便简洁、快速高效的新方法,为深刻理解和研究细胞表面的分子识别过程及药物开发和疾病诊断提供了一种新手段。
其他文献
临床上乳腺癌多见为单侧,双侧乳腺癌相对少见。双侧乳腺癌又可分为原发性和转移性乳腺癌。原发性双侧乳腺癌是指两侧乳腺同时或先后发生的原发癌灶,是多源癌的一种类型。我院近
本文以新媒体盛行为背景,立足职业教育现实,从课程创新改革这一视角,分别对当前课堂教学存在的问题、学生学习心理进行分析,并以此作为观察棱镜,提出适应当前经济趋势、技术
目的探讨复发性颅咽管瘤的手术治疗方法.方法回顾性分析40例复发性颅咽管瘤患者的临床资料.其中男24例, 女16例,平均年龄35.1岁.主要临床表现:视力减退25例,头痛9例,视野缺损
目的观察复合针刺法治疗中风后上肢痉挛的临床疗效并探讨其作用机制。方法 60例患者随机分为对照组和治疗组各30例。对照组进行常规康复治疗,治疗组在对照组基础上加用复合针
目的神经内镜下经鼻蝶窦入路术中能够直视肿瘤、无脑组织牵拉,已广泛应用于垂体腺瘤的手术治疗,而扩大经鼻蝶窦入路突破了传统的限制,提高了鞍上肿瘤及海绵窦区域肿瘤的切除率。
措钦大殿是白居寺主要建筑之一,殿内壁画在整个白居寺中占有重要地位,为保护修复白居寺措钦大殿壁画,需要对壁画制作材料和工艺进行分析。通过对壁画颜料和地仗层进行取样,经
本文对元曲作家石君宝的生平、现存三种剧作与本事之异同进行了考证,并全面论述了其现存剧作的思想价值与艺术成就。认为石君宝应在中国文学史及戏曲史上占有相应的地位。 T
该文首先详细介绍了热敏纸的发展概况,接着介绍了热敏记录体系即双组分体系和热转移体系。然后重点讲述了热敏纸的生产,包括热敏原纸、涂料配比和涂布方式,最后介绍了几种新
目的:研究颅咽管瘤患者采用神经内镜扩大经鼻蝶切除术与开颅术切除的临床效果。方法:临床纳入我院2015年6月至2018年1月期间收治的76例颅咽管瘤患者作为研究对象,按手术情况
本文从审美的具象性、装饰性、意象性、抽象性四方面特征出发,论述俄罗斯油画艺术语言的基本审美特征。