聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白为吸附标记的新型融合蛋白纯化系统

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我们构建了一个由聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates, PHA)颗粒结合蛋白Phasin、自裂解蛋白Intein和PHA纳米颗粒组成的新型融合蛋白纯化系统。要纯化的目的蛋白的基因与Phasin、Intein基因重组在一起,在Escherichia coli中表达由Phasin、Intein和目的蛋白组成的融合蛋白。融合蛋白随着菌体的破碎与其它细菌蛋白一起释放到细胞裂解液中。疏水的纳米颗粒与这些细胞裂解液共同孵育后,融合蛋白结合到颗粒的表面。离心收集结合有融合蛋白的颗粒,通过Intein的自裂解使目的蛋白从融合蛋白上裂解下来,离心使目的蛋白与剩余的Phasin和Intein融合蛋白分离。应用此方法得到了增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorecsent protein, eGFP)、谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione - S– transferase, GST)、麦芽糖结合蛋白(Maltase binding protein, MBP)和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, LacZ)四种纯化的蛋白,并且最终得到的目的蛋白都具有较高的活性,证明此方法是一种高效可行的蛋白纯化方法。该方法可以以最低的成本生产高附加值的目的蛋白,有很高的商业价值。
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