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目的通过制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic ischemic brain damage,HIBD）实验动物模型,同时给予中药银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）、PI3K-AKT信号通路抑制剂（LY294002）、MEK-ERK信号通路抑制剂（U0126）进行干预,观察HIBD后各组大鼠脑源性神经生长因子（Brain-derived neutrophic factor,BDNF）、磷酸化-AKT（ser473）[P-AKT（ser473）]、磷酸化-ERK1/2（P-ERK1/2）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved caspase-3,CC3）的表达水平及神经细胞凋亡情况,探讨银杏内酯B对HIBD后新生大鼠脑BDNF表达的影响,以及PI3K-AKT/MEK-ERK信号传导通路在银杏内酯B抗HIBD新生大鼠神经细胞凋亡中的作用,以期为缺氧缺血性脑损伤治疗开辟新途径和新思路,减少HIBD后遗症的发生。方法首先将160只SPF级新生7日龄SD大鼠按随机数字表法分4组:假手术组（Sham组）、缺氧缺血组（HI组）、GB低剂量组（10mg/Kg）和GB高剂量组（20mg/Kg）,其中,GB治疗组于缺氧缺血后0h、24h经腹腔给药,且各组分别于术后不同时间点（6h、12h、24h、48h）随机处死大鼠各10只,断头取脑,采用聚合酶链反应法检测BDNFmRNA及Caspase-3mRNA的表达水平,筛选出效应强度最佳时间点,即为缺氧缺血后24h,且GB高剂量组效果优于GB低剂量组。然后将另外140只SD大鼠按随机数字表法分为7组:假手术组（Sham组）、缺氧缺血组（HI组）、GB组（20mg/Kg）,LY294002组、GB+LY294002组、U0126组、GB+U0126组,每组各20只。其中,LY294002组和GB+LY294002组均于造模前30min给予LY294002（1.8mg/Kg）,U0126组和GB+U0126组均于造模前30min给予U0126（0.2mg/Kg）;参照经典Rice法制备HIBD实验动物模型,GB组、GB+LY294002组和GB+U0126组均于造模后即刻经腹腔注射银杏内酯B（20mg/Kg）,然后各组于缺氧缺血后24h断头取脑。苏木精-伊红染色法（HE染色）观察脑白质病理改变,原位切口末端标记法法（TUNEL）检测脑神经细胞凋亡情况,同时分别采用免疫组化和Western blotting对脑组织中BDNF、P-AKT（ser473）、P-ERK1/2及CC3蛋白进行定位和定量。数据以sx±表示,采用SPSS17.0软件包进行统计分析,定量资料多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t法,以α=0.05为检验水准。结果1聚合酶链反应（PCR）结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血后不同时间点大鼠脑组织Caspase-3mRNA上调,同时促进缺氧缺血后BDNFmRNA表达,发挥神经保护功能。具体结果如下:与Sham组比较,缺氧缺血后6 h HI组和两治疗组大鼠脑Caspase-3mRNA开始出现升高,BDNFmRNA开始下降;12h Caspase-3mRNA进一步上升,BDNFmRNA进一步下调,至24 h分别达到峰值和谷值,随后Caspase-3mRNA呈下调趋势,BDNFmRNA也有所回升。但各时间点两治疗组Caspase-3mRNA水平均低于HI组,BDNFmRNA水平均高于HI组,且HIBD后24h差距最明显,GB高剂量组效果优于GB低剂量组。2苏木精-伊红染色（HE）结果银杏内酯B可减轻HIBD新生大鼠神经细胞水肿。具体结果如下:Sham组神经细胞形态结构基本正常,胞浆、胞核分别被染成粉红色与深蓝色;缺氧缺血后24 h,HI组神经细胞水肿较为明显,呈空泡样或气球样改变,同时可见炎性细胞浸润,血管内皮细胞明显肿胀;GB治疗组（20mg/kg）细胞水肿有所减轻,仅少部分细胞出现水泡样改变。3原位切口末端标记法（TUNEL）结果银杏内酯B可减轻HIBD新生大鼠神经细胞凋亡。具体结果如下:Sham组仅可见个别凋亡细胞;与Sham组比较,HI组和GB组（20mg/kg）凋亡细胞计数增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与HI组比较,GB组凋亡细胞计数有所降低,差异亦有统计学意义（P<0.01）。4免疫组织化学结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血诱导的CC3阳性细胞计数增加,同时上调BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞计数,减少缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡水平,且这一作用可被LY294002抑制剂所抑制。具体结果如下:与Sham组比较,HI组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）阳性表达细胞减少,而凋亡因子CC3阳性表达细胞增多,差异均有统计学意义（P<0.05）;此外,与HI组比较,GB组（20mg/Kg）BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞增多,CC3阳性细胞减少,差异亦均有统计学意义（P<0.05）;然而,各组间大鼠脑P-ERK1/2阳性细胞计数均较少,且差异无统计学意义（P>0.05）。与GB（20 mg/kg）治疗组比较,LY294002组和GB+LY294002组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）阳性细胞减少,CC3阳性细胞增多,差异均有统计学意义（P<0.05）;而LY294002组和GB+LY294002组相比,上述蛋白阳性细胞计数差异无统计学意义（P>0.05）。与U0126组比较,GB组和GB+U0126组大鼠脑BDNF阳性表达细胞增多,而CC3阳性表达细胞减少,差异均有统计学意义（P<0.05）;与GB组比较,GB+U0126组BDNF及CC3阳性细胞计数无明显变化,而P-ERK1/2阳性细胞数减少,差异有统计学意义（P<0.05）。5蛋白印记结果银杏内酯B可抑制缺氧缺血诱导的CC3蛋白表达水平增加,同时上调脑组织中BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达水平,发挥抗缺氧缺血脑损伤神经细胞凋亡的作用,且这一作用可被LY294002抑制剂所抑制;而P-ERK1/2蛋白表达水平对银杏内酯B功能的发挥无明显的影响。具体结果如下:与Sham组比较,HI组大鼠脑BDNF及P-ATK（ser473）蛋白表达有所下调,凋亡因子CC3表达明显上调,差异均有统计学意义（P<0.05）;与HI组比较,GB组（20mg/Kg）大鼠脑BDNF及P-ATK（ser473）蛋白表达量增多,CC3蛋白表达有所减低,差异亦均有统计学意义（P<0.05）;然而,以上各组P-ERK1/2蛋白表达水平均较低且无明显变化趋势;与GB组（20mg/Kg）相比,LY294002组和GB+LY294002组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达量明显降低,凋亡因子CC3蛋白含量明显升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）,而LY294002组和GB+LY294002组相比,上述蛋白的表达量无明显变化,差异不具有统计学意义（P>0.05）;与U0126组比较,GB和GB+U0126两组大鼠脑BDNF和P-AKT（ser473）蛋白表达水平均上调,凋亡因子CC3蛋白表达水平均下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;而U0126组和GB+U0126组大鼠脑P-ERK1/2蛋白表达水平极低,与GB组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1银杏内酯B能够抑制缺氧缺血后新生大鼠脑组织Caspase-3mRNA上调及BDNFmRNA下调,且于HIBD后24h抑制程度最明显,GB高剂量组效果优于GB低剂量组;2银杏内酯B能够下调缺氧缺血后新生大鼠脑CC3蛋白表达水平,减轻脑损伤后神经细胞凋亡;3银杏内酯B能够促进HIBD后新生大鼠脑BDNF分泌,发挥神经保护作用;4 PI3K/AKT信号通路在银杏内酯B抗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经细胞凋亡的过程中起着重要作用;而MEK/ERK信号通路对银杏内酯B神经保护作用的发挥无明显的影响。