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目的:通过检测脾气虚大鼠的行为学及海马神经元的线粒体的超微结构、基本功能和线粒体自噬水平,探讨脾气虚引起心神不足的可能机制。材料与方法:1.动物分组16只SPF级SD雄性大鼠,根据随机数字表平均分为正常组和脾气虚证模型组（模型组）,每组各8只。2.脾气虚证模型的建立及评价建立方法:模型组大鼠采用饮食失节法加劳倦刺激法,即饱食24小时后禁食48小时,循环5次,共15天,全程自由饮水;同时每日游泳至力竭。评价标准:消瘦、食少、神疲乏力和皮毛枯槁。实验方案已经由我校的实验动物伦理委员会审核合理并通过（批号:20151205）。3.行为学检测采用Etho Vision XT 9.0软件和TM-Vision行为学实验系统检测。将进食水2h后的大鼠放入检测箱中心区域,记录其5min内的中心和周边活动时间、运动距离、平均运动速度和站立次数。4.取材大鼠腹部注射10%的水合氯醛麻醉液（0.35mL/100g）后,迅速断头后开颅取出双侧海马,部分-80℃保存;部分切成约1mm3若干块,2.5%戊二醛溶液进行固定;部分加入线粒体蛋白分离缓冲液,充分匀浆后离心（1kg,5min,4℃）,取上层析出液,在上述的条件下,再做一次做离心处理实验,吸取上清液离心（1.2kg,10min,4℃）,取底层沉淀加入100μL PBS（pH7.4）,制作线粒体悬浊液。5.海马神经元的线粒体形态学观察用戊二醛液固定的海马组织,PBS漂洗,再使用1%的锇酸用来固定组织,乙醇、丙酮梯度脱水后环氧树脂包埋和制片,3%醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,透射电镜观察拍片。6.海马神经元线粒体的功能评价取线粒体悬浊液,严格按说明书方法操做,JC-1法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）,ELISA法检测三磷酸腺苷（adenosine triphosphatase,ATP）和反应性氧簇（reactive oxygen spieces,ROS）水平。7.海马神经元线粒体相关蛋白表达取-80℃保存海马组织,室温解冻后,加入配制好的线粒体蛋白质裂解液,放到无菌箱30 min后,冰上细细磨碎,4℃离心10min后取上清液;用BCA方法检测上清液中蛋白浓度,再加入2×SDS-PAGE蛋白缓冲液,100℃水中煮沸,变性失活后电泳,转膜与切膜后,放于37℃水中降温,脱水,实验用5%的脱脂奶粉做成/TBST完成封闭,整个封闭时间为2小时,再分别予以加入PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase 1,PINK1）（1︰1000）、Parkin（1︰1000）、微管相关蛋白1轻链3（Light chain 3,LC3,LC3）-I（1︰5000）和LC3-II（1︰2000）等4mL,4℃恒温下摇床过夜;再进行洗膜,实验用TBST法完成,然后将实验前准备好的山羊抗兔二抗（1:5000）放入其中,此抗体标有HRP标记。将上述抗体4mL放入GAPDH（1︰1000）盒内,将其放于室内常温孵育1.5小时,再完成洗膜,加入ECL发光液显影和曝光,应用Alpha View计算相关蛋白的相对表达值。8.数据处理实验获取的数据采用均值±标准差（X±s）表示,应用SPSS18.0分析软件的t检验比较二组差异,以P<0.05为有统计意义。结果:1.行为学正常组和模型组大鼠在旷场中的运动距离分别为6524.32±1435.32cm和5772.60±1621.93cm（n=8,P>0.05）,中心活动时间为21.19±10.18s和41.76±22.86s（n=8,P<0.05）,周边活动时间为278.85±10.11s和258.27±22.86s（n=8,P<0.05）,平均速度为4.57±0.78cm/s和3.31±1.00cm/s（n=8,P<0.05）,站立次数为15.4±3.2次/5min和8.5±2.9次/5min（n=8,P<0.01）。2.海马神经元线粒体形态与正常组比较,模型组线粒体嵴消失现象明显,自噬样结构较少。3.海马线粒体功能正常组和模型组的海马神经元ATP含量分别为0.217±0.088 pmo L/g和0.090±0.043pmo L/g（n=8,P<0.01）,MMP为0.728±0.170和0.591±0.012（n=8,P<0.05）,ROS水平13.55±5.44 UI/mL和11.76±3.59UI/mL（n=8,P>0.05）。4.海马线粒体PINK1/Parkin通路正常组和模型组海马神经元的PINK1的相对表达量分别为0.804±0.074和0.416±0.124（n=4,P<0.05）,Parkin相对表达量分别为0.831±0.081和0.606±0.041（n=4,P<0.05）。5.海马线粒体自噬流正常组和模型组海马神经元的LC3-II相对表达量数据分别为106.06±12.79和57.60±10.05（n=4,P<0.05）,LC3-I相对表达量分别为166.86±6.05和172.58±11.13（n=4,P>0.05）,LC3-II/I比值为0.647±0.088和0.355±0.074（n=4,P<0.05）。结论:1.脾气虚时心神不足,其机制可能与线粒体损伤及其自噬水平低下所导致的海马神经元供能不足有关。