【摘 要】
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青虾(Macrobrachium nipponense)是我国重要的淡水经济养殖虾类,广泛分布在江河、湖泊和水库等淡水或咸淡水水域。青虾生长性状是重要经济性状,肌肉生长更加重要。本论文利用生物信息学技术,从青虾转录组、基因组等组学数据库中识别出肌钙蛋白I(Tn I)、肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白重链(MHC)等肌肉生长相关基因,在研究其结构、组织表达和系统发育等基础上,采用q RT-PCR方法
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青虾(Macrobrachium nipponense)是我国重要的淡水经济养殖虾类,广泛分布在江河、湖泊和水库等淡水或咸淡水水域。青虾生长性状是重要经济性状,肌肉生长更加重要。本论文利用生物信息学技术,从青虾转录组、基因组等组学数据库中识别出肌钙蛋白I(Tn I)、肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白重链(MHC)等肌肉生长相关基因,在研究其结构、组织表达和系统发育等基础上,采用q RT-PCR方法分析了它们在眼柄、肝胰腺、鳃、肌肉、胃、肠道、腹部神经节和围心腔等8个不同组织,以及在盐度0、7、14和21等四个盐度梯度下的表达特征,以期为青虾肌肉生长及盐度条件下生长性状的选育提供分子遗传基础指导。主要的研究结果如下:(1)青虾Tn I基因结构及盐度胁迫下的组织表达分析。Tn I基因c DNA全长1489 bp,包含1332 bp的ORF编码区,编码了444个氨基酸。蛋白质三级结构包含4个α螺旋,不含有β折叠。系统发育分析结果显示,Tn I基因在系统进化树上与十足目虾蟹类的亲缘关系较近。Tn I基因在眼柄、肝胰腺、鳃、肌肉等八个组织中都有表达,其中在肌肉组织中表达量最高,在肝胰腺中的表达量最低。盐度0升至14时Tn I基因表达量逐渐升高,盐度从14升至21时表达量降低,且21时的表达量极显著低于盐度0。(2)青虾MLC基因在16、30和41号基因组染色体群中都有发现,分别命名为MLC16、MLC30和MLC41基因。MLC16基因c DNA全长486 bp,包含423 bp的ORF编码区,编码了141个氨基酸,蛋白质三级结构包含5个β折叠和8个α螺旋;MLC16基因与软体动物亲缘关系较近,在青虾眼柄、肝胰腺、鳃、肌肉等8个组织中均有表达,其中在肌肉组织中表达量最高,在鳃组织中表达量最低;盐度0升至7时MLC16基因表达量逐渐升高,盐度从7升至21时表达量降低,盐度21表达量显著低于盐度0。MLC30基因c DNA全长1024 bp,包括828 bp的ORF编码区,共编码了276个氨基酸,蛋白质三级结构包含4个β折叠和8个α螺旋。MLC30基因与十足目和软体动物的亲缘关系较近,在眼柄、肝胰腺、鳃、肌肉、胃、肠道、腹部神经节和围心腔等八个组织中均有表达,其中在肌肉组织中的表达量最高,在腹部神经节的表达量最低。盐度0升至7时MLC30基因表达量逐渐升高,盐度从7升至21时表达量降低,盐度21表达量极显著低于盐度0。MLC41基因c DNA全长413 bp,包括360 bp的ORF编码区,共编码了120个氨基酸。,蛋白质三级结构包含5个β折叠和7个α螺旋。MLC41基因与十足目和软体动物的亲缘关系较近,在除鳃组织之外的其它7个组织中均有表达,其中肌肉组织中的表达量最高;盐度0升至7时MLC41基因表达量逐渐升高,盐度从7升至21时表达量降低,盐度21表达量极显著低于盐度0。(3)青虾MHC基因分别在7、17号基因组染色体群上识别,命名为MHC7、MHC17基因。MHC7基因c DNA全长2379 bp,包括2109 bp的ORF编码区,共编码了703个氨基酸;蛋白质三级结构包含8处α螺旋、不包含β折叠;MHC7基因与十足目动物的亲缘关系较近,在围心腔组织中表达量最高,在胃、鳃、肠道、围心腔和肝胰腺表达量都很低。MHC17基因c DNA全长6021 bp,包括5811 bp的ORF编码区,共编码了1937个氨基酸。蛋白质三级结构包含16处α螺旋、不包含β折叠。MHC17基因与十足目动物的亲缘关系较近,在除眼柄之外的其它7个肌肉组织中的表达量最高,在眼柄中没有表达;盐度0升至14时MHC17基因表达量逐渐升高,盐度从14升至21时表达量降低,盐度21表达量极显著低于盐度0。综上所述,本研究发现青虾生长相关基因Tn I、MLC、MHC在肌肉生长中发挥着重要的作用。青虾这3个肌肉生长基因在低于盐度7胁迫下会促进生长,在高于盐度7胁迫会减缓生长。在生产生活中,就盐度较低的盐碱地利用养殖青虾有可能会带来较高的经济效益。
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