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本文首次建立了绵羊血浆中地昔尼尔的HPLC检测方法和组织中地昔尼尔的UPLC-MS/MS检测方法,并借此研究地昔尼尔乳剂在绵羊体内药动学规律及其与国外参比制剂Clik(?)的相对生物利用度,同时通过对地昔尼尔乳剂在绵羊体内的残留研究,为临床用药提供理论依据,为估算地昔尼尔乳剂在绵羊体内的休药期提供参考。1绵羊血浆中地昔尼尔含量检测方法的建立建立一种测定绵羊血浆中地昔尼尔含量的HPLC法。采用X Bridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈和水,梯度条件洗脱,紫外检测波长为267nm,进样量为20 μL,流速为1.0 mL·min-1,柱温为30℃。结果显示:地昔尼尔在20～10 000 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,R2>0.999,定量限(LOQ)为20 ng.mL-1,检测限(LOD)为 6 ng.mL-1。地昔尼尔以定量限、低、中、高(20、100、1 000、10 000 ng·mL-1)4个浓度添加水平的回收率均大于80%,批内和批间变异系数均小于15%。该方法专属性强、重复性好、灵敏度高,适用于地昔尼尔乳剂在绵羊体内的药动学研究。2地昔尼尔乳剂在绵羊体内的药动学研究本试验比较了健康绵羊经皮肤浇泼地昔尼尔乳剂和进口地昔尼尔乳剂(Clik(?))后的药动学特征及生物利用度。选用12头健康绵羊随机分为地昔尼尔乳剂组和Clik(?)组,公母各半,并以35 mg.kg-1的剂量于背正中线浇泼给药,在不同时间点内于颈静脉处采血,分离血浆,采用HPLC法测定地昔尼尔的血药浓度。结果显示:地昔尼尔乳剂组药动学参数:消除半衰期(T1/2λz)、达峰时间(Tmax)、达峰浓度(Cmax)、药时曲线下面积(AUC0→t)分别为 25.35±7.50 h、46.00±4.90 h、473.73±102.53 ng.mL-1、20856.38±4 178.93 ng.mL-1.h;Clik(?)组药动学参数:T1/2λz、Tmax、Cmax、AUC0→t 分别为33.91±10.54h、44.00±6.20h、469.08±126.34 ng.mL-1、23 475.42±6 845.78 ng.mL-1·h。地昔尼尔乳剂的相对生物利用度为88.84%。3绵羊组织中地昔尼尔残留检测方法的建立本试验建立了一种检测绵羊组织中地昔尼尔及其代谢产物2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶质量浓度的UPLC-MS/MS法。本试验条件下,绵羊肌肉、脂肪、肝脏、肾脏组织经过匀浆、提取、净化、浓缩后,0.22 μm滤膜过滤,上样检测。结果显示:各组织中地昔尼尔和2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶的添加浓度在20～1 000 μg·kg-1范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数R2>0.99,定量限为20 μg·kg-1,检测限为10 μg·kg-1。将地昔尼尔和2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶以高、中、低、定量限4个浓度水平分别添加到空白肌肉、脂肪、肝脏、肾脏组织中,测得各组织中地昔尼尔和2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶的回收率为70%～110%,批内和批间变异系数均小于15%。结果表明该方法专属性强、重复性好、灵敏度高,适用于地昔尼尔乳剂在绵羊体内的残留研究。4地昔尼尔乳剂在绵羊体内的残留研究应用UPLC-MS/MS法对绵羊组织中地昔尼尔及其代谢产物2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶的残留消除规律进行研究,确定临床上地昔尼尔乳剂浇泼给药的休药期。以35 mg.kg-1的单剂量于绵羊背正中线皮肤浇泼地昔尼尔乳剂,于给药后的第1(12h)、7、14、21、35 d剖杀,采集给药部位肌肉、非给药部位肌肉、内脏脂肪、皮下脂肪、肝脏、肾脏组织。组织样品经过处理,上样检测。结果显示:给药后的前14 d内,各组织中的地昔尼尔和2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶消除较快;给药后35 d各组织中的地昔尼尔和2,4,6-三氨基-5-氰基嘧啶之和均低于最高残留限量(MRL)。结果表明:以单剂量35 mg.kg-1地昔尼尔乳剂给绵羊局部浇泼使用后,建议休药期为45 d。