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婴幼儿配方食品是一种备受国人关注的特殊食品,也是婴幼儿重要的食物来源,陕西省婴幼儿配方羊乳粉的生产、加工及销售在全国具有明显的优势。蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)是一种可产生芽胞的条件致病菌,在环境中广泛存在,婴幼儿感染蜡样芽胞杆菌可诱发菌血症、心膜炎及脑膜炎等并发症。我国食品安全监管日益严苛、全产业链追踪日益全面,探究婴幼儿配方羊乳粉生产环节蜡样芽胞杆菌的潜在污染分布规律及其防控技术至关重要。本研究的样品采自陕西省3家生产规模及方式不同的、具有代表性的婴幼儿配方羊乳粉加工企业,进行连续2个产季的跟踪,每厂采样间隔为4周,共计12周。样品涵盖内源污染(湿区和干区)和外源污染的液样、涂抹样、粉末样、平皿沉降样四种状态,其中内源污染涉及生产产品、原辅料、设备、环境、器具、传送带及人员等,旨在探究婴幼儿配方羊乳粉各生产环节蜡样芽胞杆菌的污染状况,并结合分型结果推断其潜在污染途径。综合考虑污染特点、潜在污染途径及成品粉分离株基因型提出防控技术优化方案,为生产更健康、优质的婴幼儿配方羊乳粉提供理论依据和技术支撑,主要结论如下:(1)依计划共采集样品970份,其中阳性样品350份(占比36.1%)。A、B、C三厂蜡样芽胞杆菌检出率分别为40.5%(83/205)、29.1%(94/323)、39.1%(173/442)。婴幼儿配方羊乳粉蜡样芽胞杆菌阳性率为46.7%(7/15),污染水平≥1100 MPN/g。污染规律显现:(1)内源污染率最高的是流化床车间40.3%(52/129),不同状态样品污染率最高为棉签涂抹样44.8%(235/525);(2)而外源污染率最高的是原辅料中的植物油60%(9/15);(3)新鲜羊奶中未检出(0.0%,0/12)。(2)将350株阳性菌进行随机扩增多态性扩增片段长度多态性(Random amplifies Polymorphic DNA,RAPD)分型,分为12个型别(T1-T12),4个独株(3L4、3L33、3L47、1L63)。分厂分型结果:将A厂82株分为3个型别(S1-S3),2个独株(1S21、4S14);B厂94株分为7个型别(Y1-Y7);C厂173株分为6个型别(L1-L6),6个独株(3L4、3L47、5L45、2L21、1L63、3L33)。(3)基因多样性表明:(1)婴幼儿配方羊乳粉生产环节的蜡样芽胞杆菌分离株经多位点序列分型(Multiple Locus Sequence Typing,MLST)技术分为7个ST型,分别为ST-770(4.8%,2/42)、ST-1000(71.4%,30/42)、ST-1084(9.5%,4/42)、ST-1348(2.4%,1/42)、ST-1349(2.4%,1/42)、ST-1350(2.4%,1/42)和ST-1351(7.1%,3/42),其中ST-1000是成品粉分离株的主要ST型,车间内部存在交叉污染;(2)发现了4个新的ST型和4个新的等位基因,分别是ST-1348、ST-1349、ST-1350、ST-1351和glp-253、glp-254、ilv-277、pyc-199,表现出进化变异;(3)分离株ST型隶属于205、142、23三个克隆谱系和2个单态群(ST-770和ST-1351),而ST-1348和ST-1349为独株,无祖先克隆复合物。(4)优化的防控措施为:(1)最优在线清洗(Cleaning In Place,CIP)方案为:热水预冲洗——碱液清洗(1.5%NaOH,65℃,30min)——热水冲洗——酸液清洗(1%HNO3,65℃,10min)——热水冲洗。(2)对于原辅料中污染率最高的植物油,除生产环节使用优化CIP方案外,还应严格把控货源、加强原辅料质检。(3)生产区域加强干区和湿区严格管理,洁净区与非洁净区严格分开,并确保辅料室洁净卫生。(4)加强生产人员的个人卫生管理。(5)加强车间紫外杀菌和O3杀菌并举以达有效防控。综上,蜡样芽胞杆菌的工厂防控应涵盖“人、机、料、法、环”各个方面以达有效防控。