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目的:近年来,中医扶正抗癌治则已得到临床的认可。温阳法作为扶正抗癌细化法则之一,在临床的应用虽有收效,但以个案居多,还未得到广泛的认可。本课题旨在研究温阳法代表方四逆汤及其温阳单药附子与干姜,温阳药对配伍,及不同剂量附子的四逆汤对胃癌SGC-7901细胞的体外抗癌作用以及对抗癌机制进行初探,为完善温阳法抗癌理论提供实验依据。
方法:采用MTT,3H-TdR掺入法观察温阳方四逆汤,四逆汤中附子、干姜、附子与干姜不同配伍比例,及不同剂量附子的的四逆汤对胃癌SGC-7901细胞体外的抑制作用。在体外抑瘤实验的基础上,采用Annexin V-FITC/PI双染法观察温阳药附子诱导胃癌SGC.7901细胞凋亡作用。
结果:(1)附子低剂量(20mg/ml)作用胃癌SGC-7901细胞24h、48h、72h均具有抑制作用,在24h与空白组比较无明显差异(P>0.05),48h,72h均具有明显差异(P<0.05);附子中剂量(40mg/ml)、高剂量(80mg/ml)作用胃癌SGC-7901细胞在24h、48h、72h均具有明显的抑制细胞增殖作用(P<0.05);附子高剂量随着时间的延长其抑制作用明显增强。(2)干姜以低剂量(20mg/ml)、中剂量(40mg/ml)、高剂量(80mg/ml)作用胃癌SGC-7901细胞24h后,均显示明显的抑制作用(P<0.05):中、高剂量无明显差异(P>0.05)。(3)附子与干姜各配伍比例组(4:1、2:1、1:1)作用胃癌SGC-7901细胞48h后均具有明显的抑制作用(P<0.05),以1:1组抑制作用最明显;与附子高剂量比较,附子与干姜各配伍组抑制胃癌SGC-7901细胞作用更明显(P<0.05)。(4)传统四逆汤(1.5:1:1)中剂量(60mg/ml)、高剂量(80mg/ml)对胃癌SGC-7901细胞均具有一定的抑制增殖作用,并且这种抑制作用随剂量的加大而逐渐增强(P<0.05);重用附子的四逆汤(3:1:1)具有明显抑制作用(P<0.05),传统四逆汤与重用附子四逆汤比较,前者的抑制作用明显高于后者(P<0.05)。(5)附子可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,而高剂量附子诱导凋亡可能呈时间依赖性。
结论:温阳药附子及干姜均具有抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用;干姜配伍附子后,对附子抑制增殖具有增效作用,且二者配伍比例以1:1作用效果最明显;不同附子剂量的四逆汤对胃癌SGC-7901细胞均有抑制增殖的作用,而传统配伍比例的四逆汤抑制作用较明显。这为中医温阳法治疗胃癌提供了一定的实验依据,并对中医复方配伍药对及配伍剂量的关系提供了一些研究思路。附子诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,可能为抗胃癌的作用机制之一。