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目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株SW1990跨膜转运吉西他滨的影响。
方法:将能特异性下调nENT1的pSilence-hENT14.1-CMVneo的重组质粒以及对照质粒转染到胰腺癌SW1990细胞内。采用G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR检测hENT1mRNA表达情况。培养SW1990细胞、pSilence-hENT1Si-SW1990、pSilence-Control-SW1990细胞,三组细胞培养基中均含吉西他滨100μg/ml,温育0,15,30min,1,2,4h后收集细胞。取等量细胞悬液2份各100μl,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据蛋白--细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度。
结论:下调hENT1可以抑制胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨的摄取,hENT1是吉西他滨跨膜转运的重要通道。