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目的:(1)同步观察电针心经对急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)大鼠交感神经和迷走神经放电的影响,探讨两者在电针心经改善急性心肌缺血的协同调节作用;(2)同步观察室旁核(Paraventricular Nucleus,PVN)神经元放电、交感神经放电、血流动力学指标的变化,并对其进行相关性分析,探讨海马-室旁核-交感神经通路在针刺心经抗心肌缺血中的作用;(3)同步观察孤束核(Nucleus Tractus Solitarii,NTS)神经元放电、迷走神经放电、血流动力学指标的变化,并对其进行相关性分析,探讨海马-孤束核-迷走神经通路在针刺心经抗心肌缺血中的作用。方法:1、电针心经对急性心肌缺血大鼠交感神经和迷走神经放电的影响。根据随机数字表法,将(Sprague Dawley,SD)大鼠随机分为伪手术组、模型组和电针心经组,每组10只。模型组与电针心经组参照郭鹞法,通过结扎冠状动脉左前降支,复制大鼠AMI模型。电针心经组给予电针刺激大鼠心经“神门(HT-7)-通里(HT-5)”经脉段,连接SDZ-IV电针治疗仪,选择刺激参数:电流强度1 mA,频率2 Hz,刺激时间20 min。用两根铂金丝记录电极分别同步引导左侧交感神经和迷走神经,参考针式电极插在周围组织皮下。采用BIOPAC多导生理记录仪,同时记录模型复制前5 min,结扎后即刻,电针后1 min、3 min、5 min、15 min大鼠血流动力学指标心率(Heart Rate,HR)、心电图(ECG)J点,交感神经和迷走神经放电,通过Acqknowledge软件分析各组大鼠心率(HR)、心电图J点,交感神经和迷走神经放电频率。2、电针心经对急性心肌缺血大鼠室旁核神经元放电、交感神经放电、血流动力学指标变化的影响。根据随机数字表法,将SD大鼠随机分为伪手术组、模型组、电针心经组和损毁海马+电针心经组,每组6只。模型组、电针心经组和损毁海马+电针心经组参照郭鹞法,通过结扎冠状动脉左前降支,复制大鼠AMI模型。损毁海马+电针心经组采用脑内微量注射海人藻酸的化学损毁方法,损毁双侧海马。电针心经组和损毁海马+电针心经组给予电针刺激大鼠心经“神门(HT-7)-通里(HT-5)”经脉段,刺激参数:电流强度1 mA,频率2 Hz,刺激时间30 min,每天1次,连续3次。将微电极阵列植入各组大鼠室旁核内,利用Plexon在体多通道信号采集系统,记录各组大鼠室旁核神经元的动作电位(Spikes)和局部场电位(Local Field Potential,LFP),通过Offline Sorter软件对原始电信号(Wide Band,WB)进行数据处理和聚类分析,通过NeuroExplorer软件分析各组大鼠室旁核神经元放电频率(Spike Counts)、峰电位值(Peak Value)、最大峰值和能量频谱(Spectrogram),并取电针后采样序列进行自相关分析;利用BIOPAC多导生理记录仪,观察各组大鼠交感神经放电,血流动力学指标心率(HR),通过颈总动脉插管观察血流动力学指标平均动脉压(Mean Arterial Pressure,MAP)和心率收缩压乘积(Rate Pressure Product,RPP)。3、电针心经对急性心肌缺血大鼠孤束核神经元放电、迷走神经放电、血流动力学指标变化的影响。根据随机数字表法,将SD大鼠随机分为伪手术组、模型组、电针心经组和损毁海马+电针心经组,每组6只。模型组、电针心经组和损毁海马+电针心经组参照郭鹞法,通过结扎冠状动脉左前降支,复制大鼠AMI模型。损毁海马+电针心经组采用脑内微量注射海人藻酸的化学损毁方法,损毁双侧海马。电针心经组和损毁海马+电针心经组给予电针刺激大鼠心经“神门(HT-7)-通里(HT-5)”经脉段,刺激参数:电流强度1 mA,频率2 Hz,刺激时间30 min,每天1次,连续3次。将微电极阵列植入各组大鼠孤束核内,利用Plexon在体多通道信号采集系统,记录各组大鼠孤束核神经元的动作电位(Spikes)和局部场电位(Local Field Potential,LFP),通过Offline Sorter软件对原始电信号(Wide Band,WB)进行数据处理和聚类分析,通过NeuroExplorer软件分析各组大鼠孤束核神经元放电频率(Spike Counts、Firing Rate)、峰电位值、最大峰值和能量频谱,并取电针后采样序列进行神经元的放电间隔(Interspike Intervals,ISI)分析和自相关分析;利用BIOPAC多导生理记录仪,观察各组大鼠迷走神经放电,血流动力学指标心率(HR),通过颈总动脉插管观察血流动力学指标平均动脉压(Mean Arterial Pressure,MAP)和心率收缩压乘积(Rate Pressure Product,RPP)。结果:1、AMI模型复制前,各组大鼠心率、心电图J点、交感神经和迷走神经放电频率基本一致(P>0.05);AMI模型复制后,与伪手术组比较,模型组大鼠各时相心率,心电图J点,交感神经放电频率显著升高(P<0.01),迷走神经放电频率显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针心经组大鼠各时相心率,心电图J点,交感神经放电频率均显著降低(P<0.01),迷走神经放电频率显著升高(P<0.01),且上述各指标于电针后5 min时相前后呈现各自相反的变化趋势(P<0.01或P<0.05)。2、(1)各组大鼠交感神经、血流动力学指标变化:与伪手术组比较,模型组交感神经放电频率、HR显著升高(P<0.01),MAP、RPP显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针心经组交感神经放电频率、HR显著降低(P<0.01),MAP、RPP显著升高(P<0.01,P<0.05);与电针心经组比较,损毁海马+电针心经组交感神经放电频率、HR显著升高(P<0.01),MAP、RPP显著降低(P<0.01);(2)各组大鼠室旁核神经元放电聚类分析:伪手术组有2类神经元,模型组有1类神经元,电针心经组有4类神经元,损毁海马+电针心经组有3类神经元;(3)各组大鼠室旁核神经元放电频率:与伪手术组比较,模型组室旁核神经元放电频率显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针心经组室旁核神经元放电频率显著降低(P<0.01);与电针心经组比较,损毁海马+电针心经组放电频率显著升高(P<0.01);(4)各组大鼠频谱能量大小依次为:模型组、损毁海马+电针心经组、电针心经组、伪手术组;(5)各组室旁核放电频率与交感神经放电频率、血流动力学指标相关性分析:室旁核总放电频率与交感神经放电频率呈正相关(P<0.01),且室旁核中间神经元放电频率与交感神经放电频率也呈正相关(P<0.01),而室旁核锥体细胞放电频率与交感神经放电频率不相关(P>0.05)。室旁核总放电频率与HR呈正相关(P<0.01),MAP、RPP呈负相关(P<0.01);室旁核中间神经元放电频率与与HR呈正相关(P<0.01),MAP、RPP呈负相关(P<0.01),而室旁核锥体细胞放电频率与HR、MAP和RPP不相关(P>0.05)。3、(1)各组大鼠迷走神经、血流动力学指标变化:与伪手术组比较,模型组HR显著升高(P<0.01),迷走神经放电频率、MAP、RPP显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针心经组HR显著降低(P<0.01),迷走神经放电频率、MAP、RPP显著升高(P<0.01,P<0.05);与电针心经组比较,损毁海马+电针心经组HR显著升高(P<0.01),迷走神经放电频率、MAP、RPP显著降低(P<0.01);(2)各组大鼠孤束核神经元放电聚类分析:伪手术组有1类神经元,模型组有1类神经元,电针心经组有3类神经元,损毁海马+电针心经组有6类神经元;(3)各组大鼠孤束核放电间隔分析:伪手术组神经元放电个数较集中,核团内神经元相对稳定;模型组神经元放电个数呈递减离散趋势;电针心经组2类神经元放电个数较集中,1类较离散;损毁海马+电针心经组中间神经元的放电个数多数较离散,锥体细胞的放电个数呈不规则离散;(4)各组大鼠孤束核神经元放电频率:与伪手术组比较,模型组孤束核神经元放电频率显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针心经组孤束核神经元放电频率显著升高(P<0.01);与电针心经组比较,损毁海马+电针心经组孤束核神经元放电频率显著升高(P<0.01);(5)各组大鼠频谱能量大小依次为:损毁海马+电针心经组、伪手术组、电针心经组、模型组;(6)各组迷走神经放电活动与血流动力学指标相关性分析:迷走神经放电频率与HR呈负相关(P<0.05),与MAP、RPP呈正相关(P<0.05);(7)各组孤束核放电频率与迷走神经放电频率、血流动力学指标相关性分析:孤束核总放电频率与迷走神经放电频率呈正相关(P<0.01),与HR不相关(P>0.05),MAP、RPP不相关(P>0.05);电针心经组3个神经元中,中间神经元C与迷走神经放电频率呈负相关(P<0.05),与HR呈负相关(P<0.01),MAP、RPP呈负相关(P<0.05,P<0.01);而中间神经元A、B与迷走神经放电频率不相关(P>0.05),与HR不相关(P>0.05),MAP、RPP不相关(P>0.05);损毁海马+电针心经组6类神经元中,中间神经元C、D、E与迷走神经放电频率呈正相关(P<0.01),与HR呈正相关(P<0.01,P<0.05),MAP、RPP呈正相关(P<0.01,P<0.05);而中间神经元A、B、锥体细胞F与迷走神经放电频率不相关(P>0.05),与HR不相关(P>0.05),MAP、RPP不相关(P>0.05)。结论:1、电针心经能够促进急性心肌缺血大鼠迷走神经与交感神经的协同作用,共同发挥改善急性心肌缺血作用;2、海马-室旁核-交感神经通路参与了电针心经抗心肌缺血效应;室旁核中间神经元是室旁核参与电针心经抗心肌缺血效应的关键神经元;3、海马-孤束核-迷走神经通路参与了电针心经抗心肌缺血效应;孤束核中的部分中间神经元是孤束核参与电针心经抗心肌缺血效应的关键神经元。