论文部分内容阅读
目的制造糖尿病性膀胱病(2型糖尿病)的大鼠模型,探讨NGF (nerve growth factor,神经生长因子)/P407(poroxamer 407,泊洛沙姆407)即型凝胶联合脂肪干细胞移植在糖尿病性膀胱病的大鼠模型中的治疗作用及其可能的治疗机制。方法45只雄性12周龄的S-D大鼠,其中40只随机平均分成5组,其中1组为正常对照组(N组),喂普通饲料,另外4组建立2型糖尿病模型：高脂饲料喂养1个月后,分两次(隔1周)经腹腔注射低剂量的链脲佐菌素(30mg/kg,streptozotocin, STZ),持续高脂饲料喂养至实验结束。STZ注射后三个月,对所有大鼠进行两次空腹血糖测定。取5只大鼠,腹腔手术取出脂肪组织进行脂肪干细胞的分离和培养,并用10ulEdU进行标记。制备含有NGF的P407即型凝胶。对糖尿病大鼠进行治疗：第一组在膀胱壁注射0.3m1平衡盐溶液(DM组,n=8),第二组在膀胱壁注射0.3mlNGF/P407即型凝胶(A组,n=8),第三组在膀胱壁注射0.3mlADSC(B组,n=8),第四组在膀胱壁注射0.3mlNGF/P407即型凝胶+ADSC(C组,n=8)。治疗1个月后,对所有大鼠进行尿流动力学测定,最后处死进行组织学检查,包括免疫荧光测定细胞凋亡、神经分布及追踪EdU,Masson特殊染色,免疫组化进行血管密度的定量,免疫印迹进行NGF在膀胱中表达的分析。结果：糖尿病组(DM/A/B/C组)中大鼠体重较正常组显著增加,血糖水平显著升高。正常组大鼠膀胱内压及排尿曲线正常,DM组排尿曲线异常,而治疗组均有改善,正常排尿曲线比率较DM组显著升高,而联合治疗组较单一治疗组明显改善。免疫荧光中EdU阳性细胞部分表现为SMA阳性。但残留ADSC数量较注射剂量大幅减少。A/C组中膀胱组织中NGF水平明显增加。DM组细胞凋亡数目明显多于N组,而治疗后细胞凋亡数量显著减少,联合治疗组较单一治疗组减少更明显。在神经组织定量中,DM组较正常大鼠明显减少,经过治疗后神经组织得到修复,联合治疗组效果更佳。与DM组相比,N组及治疗组B/C中可见大量的CD31阳性细胞,ADSC治疗能促进血管生成。结论：单一的选用ADSC或是NGF/P407即型凝胶治疗是能够改善糖尿病大鼠模型的膀胱功能。ADSC除了通过其分化功能,还能通过抑制细胞凋亡和促进血管生成来改善膀胱功能,而NGF/P407即型凝胶治疗可以增加膀胱组织中NGF水平,二者联合治疗较单一治疗对糖尿病大鼠膀胱膀胱功能的改善会更明显。