论文部分内容阅读
茧蜂是农林害虫重要天敌，开展生物防治的有益资源。世界各地保存了大量的茧蜂标本，为了充分利用标本这一潜在的遗传资源，必须快捷、高效、低成本地提取基因组DNA，以便在分子水平上研究物种的起源、系统进化，生物多样性及天敌的引进、保护、释放等。 1．本文探讨了高温，氧化，化学修饰等影响茧蜂标本基因组DNA降解的因素，对室内保存寄生蜂标本提出应用含50mmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）的无水乙醇固定，并在液面覆盖石蜡油等可行性建议。 2．通过对茧蜂标本DNA几种提取方法的比较发现，十六烷基三乙基溴化铵（Cetyltrimethyl Ammonium Bromide，CTAB）法效果最好。本文在原有CTAB法基础上进行了改进，使用优化的方法可以从保存近20年的乙醇浸泡标本中提取出DNA，该基因组DNA可很好地用于RAPD-PCR扩增。针插干标本DNA提取有待于进一步探讨。 3．建立了茧蜂RAPD分析的技术体系：25μl反应体系中，含10mmol／l tris-HCl（PH8.0），50mmol／l KCl，2.5mmol／l MgCl2，150μmol／l dNTP，0.2μmol／l随机引物，30～60ng模板DNA，1.5U TaqDNA聚合酶。反应程序为：94℃预变性4min；94℃ 15s,36℃ 45s，72℃ 90s，45个循环；72℃维持4min。 4．在12个供试材料中，亚科之间具有多态性。对蚜茧蜂亚科下的4个属进行RAPD分析，25引物共扩增出159条带，多态条带比率（PPB）为75％。依据RAPD标记数据，对蚜茧蜂亚科4个属供试材料进行了聚类分析，结果表明：全脉茧蜂属Ephedrus Haliday和孔蚜茧蜂属Fovephedrus Chen关系最近，他们首先聚类在一起，然后和蚜茧蜂属Aphidius Nees聚在一起，最后是和少脉茧蜂Diaeretiella Stray聚在一起。与传统分类的结果相比分子系统发育关系基本相同。