【摘 要】
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目的研究Mg2+/I型胶原蛋白(Col Ⅰ)是否通过整合素α2β1-FAK-ERK1/2信号通路促进小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)生物学行为的研究。方法将氯化镁溶于完全培养基中,通过0.22μm的无菌
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目的研究Mg2+/I型胶原蛋白(Col Ⅰ)是否通过整合素α2β1-FAK-ERK1/2信号通路促进小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)生物学行为的研究。方法将氯化镁溶于完全培养基中,通过0.22μm的无菌过滤器过滤后,制备成10m M Mg2+溶液。复苏MC3T3-E1小鼠前成骨细胞后,根据以下分组接种细胞,A:a-MEM培养基对照组;B:10m M Mg 2+处理组;C:Col Ⅰ涂层处理组;D:10m M Mg 2+/Col Ⅰ涂层处理组。通过MTT检测细胞增殖,DAPI染色检测细胞凋亡,鬼笔环肽在共聚焦显微镜下观察细胞粘附,ALP检测细胞活性,茜素红染色分析细胞外基质的矿化,RT-PCR检测成骨分化相关基因(Runx2、BMP-2、ALP和OCN、OPN)的表达,Western blot检测信号通路蛋白(整合素α2、整合素β1、FAK、ERK1/2)的表达。结果MTT实验结果显示与A组相比,B、C、D三组细胞增殖均有提高。在细胞培养相同天数下,A、B、C、D四组OD值相比:D>C>B>A,表明D组对细胞增殖促进作用最大,各组之间有显著差异(P<0.05);DAPI染色结果显示A、B、C、D各组间细胞形态没有显著差异(P>0.05);鬼笔环肽染色实验结果显示A组细胞生长平坦且延伸不明显,B、C、D组细胞分布密集、体质饱满、可以看到延伸的、清晰的、鲜明的肌动蛋白丝;碱性磷酸酶(ALP)活性测定结果显示与A组相比,B、C、D组均促进细胞的活性,D组显著促进细胞的活性,且四组之间有显著差异(P<0.05);茜素红染色实验结果显示与A组对比,B、C、D组细胞外基质矿化结节增多,D组矿化结节最多,且四组之间有显著差异(P<0.05);Western blot实验结果显示与其它三组相比,D组FAK、整合素α2、整合素β1、ERK1/2蛋白表达水平最高,且各组之间存在显著差异(P<0.05);PCR实验检测结果显示与其它三组相比,D组成骨相关基因的表达水平最高,且各组之间存在显著差异(P<0.05)。结论本实验研究结果表明10m M Mg2+/Col Ⅰ显著促进前成骨细胞的粘附增殖和分化,且10m M Mg2+在整合素α2β1-Col Ⅰ相互结合中起促进作用,这种特定性能的潜在机制可能是通过激活整合素α2β1-FAK-ERK1/2蛋白偶联受体途径实现的。
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