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月季(Rosa spp.)是世界性的重要观赏植物之一,在切花生产、盆花栽培、城市园林绿化和香料生产中起到了非常重要的作用。中国蔷薇有2000多年的栽培历史,我国共有蔷薇属植物95种,其中64种为特有种,但野生蔷薇资源破坏严重,蔷薇资源现状不清。中国传统月季品种流传至今,适应性广,抗病性强,具备四季开花、花香芳郁宜人等优良的遗传品质。中国月季品种‘月月红’(R.chinensis’Slater’s CrimsonChina’)和‘月月粉’(R.chinensis’Parsons’Pink China’),香水月季品种‘彩晕’香水月季(R.odorata’Hume’s Blush Tea-scented China’)和‘淡黄’香水月季(R.odorata’Parks’Yellow Tea-scented China’)在现代杂种香水月季的形成过程中曾起到里程碑的作用。利用中国特有蔷薇野生种或传统月季品种的优良种质进行育种,对创造具有我国自主知识产权的月季新品种具有重要意义。因此,为避免或减少蔷薇种质资源的进一步流失与破坏,保护其资源多样性,本研究连续3年对蔷薇野生种和传统月季品种资源进行了调查、整理、分析和评价,建立种质资源圃,并采用表型、孢粉学、SSR分子标记和nrITS序列对部分蔷薇属植物的亲缘关系进行研究。本文调查范围选择蔷薇属分布最为集中的云南、四川横断山脉地区,种质特点明显的新疆伊犁、阿尔泰,长白山和北京周边地区。结合资源评价,筛选出观赏性状优良、抗白粉病的优异亲本材料,与现代杂种香水月季进行杂交育种,创造抗白粉病的月季新种质,为月季育种提供物质基础。主要结果如下:1.此次调查共计搜集43种蔷薇属植物和7个变种,隶属7组7系,占我国蔷薇属种质资源的44.8%。蔷薇属垂直分布海拔变化幅度大,介于海拔700-4300m之间。从资源现状看,峨眉蔷薇(R.omeiensis)、川滇蔷薇(R.soulieana)、长尖叶蔷薇(R.longicuspis)、山刺玫(R.davurica)、钝叶蔷薇(R.sertata)等种水平分布广泛,适应性强,变异丰富;中甸刺玫(R.prelucens)、大花香水月季(R.odorata var.gigantea)、玫瑰(R.rugosa)、深山蔷薇(R.marretii)等种群数量少,资源破坏严重,急需加强保护。采用层次分析法对蔷薇野生资源进行综合评价,筛选出华西蔷薇(R.moyesii)、刺蔷薇(R.acicularis)、黄刺玫(R.xanthina)等10个种可直接应用于园林绿化,并可作为育种亲本加以利用;川滇蔷薇、疏花蔷薇(R.laxa)、复伞房蔷薇(R.brunonii)等15种观赏性状较好,可直接或改良后选择其优良性状进行杂交育种,其后代可作为育种的中间材料进一步杂交或回交。2.调查和整理出22个中国传统月季品种,这些品种适应性广,抗性强,花型独特,芳香浓郁。将Q型聚类应用于蔷薇22个品种和2个香水月季及其变种的分类,对27个性状进行了R型聚类分析和主成分分析,选出了影响力比较大的19个性状,并根据植株性状和花部特征将传统月季品种分为4类。3.利用扫描电镜对11个蔷薇野生种和14个中国传统月季品种的花粉形态进行了系统观察和比较分析。孢粉学研究结果表明:花粉均为单粒、等极、辐射对称。花粉长球形或超长球形,极面观三裂圆形,具三孔沟,沟宽因种和品种而异,赤道面观椭圆形或长矩形,属于N3P4C5型花粉。外壁纹饰以条纹状纹饰为主,种间穿孔的有无、密度和大小有差异,传统品种间差异相对较小。根据条纹走向、粗细、间距和密度,嵴洼深浅和穿孔孔频,可将供试花粉分为5种类型。聚类分析结果表明,花粉大小和外壁纹饰特征在属内不同组间花粉形态差别较大,月季组(Sect.Chinensis)与合柱组(Sect.Synstylae)亲缘关系较近;传统月季品种中花型相似的聚为一类,亲缘关系较近,这与形态学分类基本一致。根据花粉形态演变规律可推断野生种中芹叶组(Sect.Pimpinellifoliae)为较原始的类型,桂味组(Sect.Cinnamomeae)次之,合柱组和月季组较进化。传统月季品种中‘四面镜’(R.’Si Mian Jing’)可能为最原始的品种类型,‘月月粉’、‘月月红’及‘匍匐红’(R.’Pufu Hong’)等品种较为进化。4.建立了适合于蔷薇属亲缘关系分析的SSR反应体系,筛选出蔷薇属种质资源SSR分析的引物,并利用荧光定量PCR技术,对64份蔷薇属种质资源的亲缘关系进行了研究。12对引物对供试材料具有多态性,扩增片段大小在100-400bp之间,共检测出116个等位基因变异,每个微卫星标记包含有4-15个等位基因,每对引物检测出的等位基因平均位点9.7个。聚类分析结果表明,传统月季品种分别与合柱组、月季组聚在一起,亲缘关系较近,而与木香组、小叶组(sect.Microphyllae)、芹叶组和金樱子组(sect.Laevigatae)亲缘关系较远:野蔷薇(R.multiflora)和淡黄香水月季(R.odorata var.erubescens)与现代杂种香水月季聚为一组;云南特有种中甸刺玫(小叶组)与桂味组的玫瑰和山刺玫聚为一类,而与缫丝花(R.roxburghii)(小叶组)遗传距离较远。其余聚类结果与植物学分类基本一致。5.为了进一步分析蔷薇属植物亲缘关系,本研究利用核糖体内转录间隔区分析了部分蔷薇属的nrITS序列。GeneBank登录36条nrITS序列,登录号为FJ527684-FJ527719,蔷薇属ITS序列长度范围为622—628bp,其中有85个变异位点,42个为信息位点,分别占13.5%和6.7%,G+C含量为55.9-58.4%。蔷薇属种间或品种间ITS序列变异主要存在于ITS1间隔区内。按照聚类结果,传统月季品种分别与合柱组和月季组聚在一起,与SSR分析结果基本一致,可以推导在传统月季品种的形成过程中,月季组和合柱组蔷薇具有重要作用。小叶组的中甸刺玫和缫丝花分别与不同的桂味组野生种聚在一起,这与传统分类不一致。木香组形成一个单支,与其它各组并列,显示出较远的遗传距离。6.在蔷薇属植物亲缘关系分析的基础上,统计田间自然发病率,在31个供试材料中筛选出5个高抗白粉病材料,18个抗病材料;结合观赏性状,选择11个抗病传统月季品种,与6个观赏性状优良、白粉病抗性较差的现代月季杂交,共计44个杂交组合,授粉563朵,其中29个组合获得杂交果实158个,杂交结实率为28%。并用SSR分子标记对10株杂种苗进行鉴定,其中6株具有父母本特异片段,初步推断是真杂种,有待于进一步形态学鉴定,其余4株只有母本片段。本研究为蔷薇属种质资源的保护、开发和利用、亲缘关系的研究提供了理论依据,为培育具有我国自主知识产权的月季新品种奠定了基础。