萝卜雄性不育系及其保持系的生理生化分析和SSR标记研究

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萝卜杂种优势明显,利用一代杂交种F1作为生产用种,可实现萝卜的优质、抗病和高产。为解决生产中杂交种纯度不高的问题,用雄性不育系选育杂交种是解决人工去雄最为经济、有效的途径。为扩大萝卜雄性不育系在生产上的应用范围,以萝卜雄性不育新种质为试材,对不同时期叶片及盛花期花蕾、花朵的相关生理生化指标进行测定,可进一步探讨萝卜雄性不育的生理生化机制,为萝卜雄性不育的育种提供理论依据。EST-SSR表达序列标签微卫星,是基于EST简单重复序列设计的一种新型分子标记,解决了基因组SSR开发过程中需要构建基因组DNA文库步骤繁琐等问题,已广泛应用于植物遗传图谱的构建、遗传多样性的评价、比较作图、亲缘关系的鉴定等方面。作为中国萝卜(Raphanus sativus L.)的起源地,我国萝卜种质资源丰富。但由于萝卜生物技术方面研究较少,SSR标记在萝卜上的应用国内尚未见报道,许多重要性状没能得到有效开发。对影响萝卜SSR扩增反应的因素进行研究,确立最佳反应体系,并对不育系进行SSR筛选,可为SSR标记萝卜重要性状,进而为我国萝卜种质资源的深入研究和利用奠定基础。本试验以萝卜雄性不育系及其保持系为试材,测定了不同发育时期叶片、花和花蕾中游离脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖、丙二醛、超氧阴离子、以及SOD、POD、CAT的活性。结果表明,盛花期花蕾和花朵中,不育系脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖的含量均低于保持系,丙二醛和超氧阴离子高于保持系,SOD、POD和CAT酶活性变化与萝卜的雄性不育相关;以萝卜的不育系和可育系DNA为材料,利用正交设计L16对萝卜SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验。获得了最佳的反应体系,在20ul反应体系中,0.10mmol/LdNTP,3.0mmol/LMg2+,50ng模板,0.500μmol/L引物,1.0UTaq酶。利用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了基础。同时进行了SSR分析,共筛选了300对SSR引物,其中5对引物在两池之间表现差异,可进行进一步测序和筛选。
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