实验目的:非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Carcinoma,NSCLC）,被认为是全球最高发的恶性肿瘤之一。伴随着群众健康意识的提升和低剂量CT等多种筛查手段的普及,非小细胞肺癌的发病率和检出率逐年增高。Notchless homolog1（NLE1）是重要的泛癌基因,参与了许多肿瘤、神经系统疾病和先天性疾病的发生和发展。本研究的目的是在体外探究NLE1的表达对非小细胞肺癌细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡能力、细胞迁移能力和细胞侵袭能力等功能的影响,并初步探寻和验证NLE1的下游通路基因对非小细胞肺癌的增殖和迁移功能的调控机制。实验方法:本研究第一部分将采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR）在临床非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中验证NLE1的表达情况。第二部分在人类非小细胞肺癌A549和H1299细胞系中进行试验,采用q PCR和免疫印迹法（Western Blotting,WB）研究NLE1在两种细胞株中的表达水平,构建表达NLE1-si RNA的慢病毒,感染A549和H1299细胞。采用细胞计数法、MTT法、流式细胞技术、Transwell实验验证NLE1的表达对A549和H1299非小细胞肺癌的细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡能力和细胞迁移侵袭能力的影响。第三部分采用免疫印迹法和细胞增殖试验筛选下游通路基因,使用通过敲低和过表达NLE1及下游VIM基因,验证NLE1通过调控下游靶基因表达来影响NSCLC的增殖、迁移功能。实验结果:收集并提取13例非小细胞肺癌组织及癌旁组织的RNA,q PCR实验结果显示与癌旁组织相比,NLE1在肺癌组织中的表达水平有上调趋势。构建A549-NLE1-KC和H1299-NLE1-KC稳定表达细胞株,试验表明,敲低NLE1表达水平后可显著抑制细胞生长、集落形成能力、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,并阻滞细胞进入G2/M期。NLE1敲除后,P-ERK1/2、P-NFKB-P65、TWIST、MYC、P-P38、P-Akt、CDH2、Snail、Slug、MMP2、VIM等蛋白均下调,进一步验证NLE1可以通过上调VIM的表达来上调A549细胞的增殖和迁移能力。实验结论:NLE1在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中呈现表达差异,NLE1能够促进细胞增殖、集落形成、侵袭和迁移,降低细胞的凋亡能力,并通过调控细胞周期使非小细胞肺癌细胞进入DNA合成后期/分裂期。NLE1可以通过上调VIM的表达促进非小细胞肺癌的细胞增殖、迁移能力。