论文部分内容阅读
目的:通过观察清热止血颗粒、雷公藤多苷(GTW)等药物对紫癜性肾炎(HSPN)肾小球足细胞损伤模型Nephrin、Podocin和Podocalyxin分子蛋白表达的影响,探讨各药物对紫癜性肾炎治疗作用的机制。方法:体外培养小鼠系膜细胞、小鼠足细胞,分离提纯紫癜性肾炎患儿血清中的单体Ig A1(m Ig A1),热聚合成热聚合Ig A1(aggregated Ig A1,a Ig A1),用a Ig A1与小鼠系膜细胞共培养48小时(h)后留取培养液,再用其刺激肾小球足细胞,制造足细胞损伤模型,同时分别加入清热止血颗粒、中药制剂雷公藤多苷、以上两种药物联合用药、强的松联合低分子肝素、空白含药血清及胎牛血清,分别于刺激24h和48h后收集足细胞,分别通过Western Blot(WB)及免疫荧光(Immunofluorescence,IF)两种方法测定足细胞相关蛋白表达量的变化。结果:一、分别干预24h、48h后,通过WB方法检测足细胞Nephrin、Podocin和Podocalyxin分子蛋白的表达量,结果显示三个蛋白均为正常组最高,模型组最低,差异有显著统计学意义:(1)24h后足细胞Nephrin蛋白的表达:GTW组、GTW+清热止血颗粒组及强的松+低分子肝素组的Nephrin蛋白表达较模型组明显升高,差异有显著统计学意义,清热止血颗粒组与模型组之间无统计学差异,GTW+清热止血颗粒组、GTW组及强的松+低分子肝素组三组之间互相对比无统计学意义;48h后雷公藤多苷+清热止血颗粒组较强的松+低分子肝素组蛋白量显著升高,差异有显著统计学意义。(2)24h后足细胞Podocin蛋白的表达:GTW+清热止血颗粒、强的松+低分子肝素组的蛋白量与模型组对比显著升高,差异有显著统计学意义,GTW组蛋白表达量较模型组增高,强的松+低分子肝素组较GTW组的表达显著升高,但与GTW+清热止血颗粒组相比差异无统计学意义,清热止血颗粒组蛋白表达量与模型组无差异;48h后结果:强的松+低分子肝素组较GTW组蛋白表达增高明显,但相对于GTW+清热止血方组无统计学差异。(3)24h后足细胞Podocalyxin蛋白的表达:GTW+清热止血颗粒组蛋白表达较模型组增高,差异有统计学意义,GTW组、强的松+低分子肝素组蛋白表达较模型组增高明显,差异有显著统计学意义,清热止血颗粒组蛋白表达较模型组差异无统计学意义,强的松+低分子肝素组蛋白表达较GTW+清热止血颗粒组增高,差异有统计学意义;48h后Podocalyxin蛋白的表达结果显示:GTW组、GTW+清热止血颗粒组、强的松+低分子肝素组蛋白表达较模型组增高明显,差异有显著统计学意义,三组组间比较差异无统计学意义。二、IF测定足细胞标志蛋白Nephrin、Podocin、Podocalyxin的定位表达显示:正常对照组Nephrin蛋白在足细胞胞浆表达,Podocin蛋白在足细胞胞膜表达,Podocalyxin蛋白在足细胞胞浆内呈颗粒状表达;模型组Nephrin蛋白的表达明显减弱、Podocin蛋白和Podocalyxin蛋白无表达;各组药物均能上调足细胞损伤模型上这三种蛋白的表达量。刺激48h与24h相比,细胞数量急剧下降,细胞形态不完整,部分细胞呈破絮状。结论:1、GTW、GTW+清热止血颗粒、强的松+低分子肝素均有修护损伤足细胞的作用。2、GTW+清热止血颗粒对于足细胞结构蛋白Nephrin的修护作用可能比强的松+低分子肝素的效果好;强的松+低分子肝素在保护Podocin蛋白方面可能优于单用GTW,GTW+清热止血颗粒可起到协同作用。强的松+低分子肝素在保护Podocalyxin蛋白方面较GTW、GTW+清热止血颗粒起效快,但是随着时间推移三者疗效无差异。