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目的：1.采用DNA微阵列芯片法检测从人外周血提取的DNA中线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase2, ALDH2)基因多态性,并筛选符合临床试验标准的受试者。2.进行中国健康男性志愿者单次喷服硝酸异山梨酯喷雾剂后硝酸异山梨酯(ISDN)及其两代谢物(2-单硝酸异山梨酯和5-单硝酸异山梨酯)药代动力学研究,并评价ALDH2基因多态性对三者药代动力学的影响。3.进行中国健康男性志愿者单次喷服单硝酸异山梨酯喷雾剂后5-单硝酸异山梨酯(5-ISMN)药代动力学研究,并评价ALDH2基因多态性对其药代动力学的影响。4.运用分子对接软件模拟酶与底物的作用过程,以硝酸甘油(GTN)为参考药,从分子水平探讨ALDH2基因多态性对ISDN和5-ISMN药代动力学的影响。方法：1.入组前,采集每位受试者肘静脉血3mL, EDTA抗凝,采用血液DNA提取试剂盒,提取血样DNA; ALDH2基因特异引物经PCR扩增后,将带有生物素标记的扩增产物与固定在醛基基片上的ALDH2基因型检测探针进行特异性杂交反应,并通过酶促显色反应,使特异性杂交信号显色；对芯片进行扫描,得到样品DNA与ALDH2基因位点的野生型和突变型探针杂交形成的杂交图像；经BaiO BE-2.0生物芯片识读仪分析该图像,判断待检样品的基因型。经查体和实验室检查后,筛选出20名健康男性受试者,在了解试验内容、权利、义务和风险的基础上签署知情同意书。2.筛选出的20名健康男性受试者,按基因型分为野生组和突变杂合组,单次喷服硝酸异山梨酯喷雾剂3.75mg,于给药前和给药后2、4、6、8、10、12、15、20、30、45min和1、1.5、2、3、4、6、8、12、24h,肘静脉取血5mL置于试管中(肝素抗凝),5000rpm、离心5min,取上层血浆,-20℃保存待测。GC-ECD法测定血浆中ISDN、5-ISMN和2-单硝酸异山梨酯(2-ISMN)的浓度,采用DAS2.0.1药代动力学软件分别计算三者的药代动力学参数(t1/2、Tmax、Cmax、 AUC0-t和AUC0-∞),并对两组药代动力学参数进行统计学分析(代谢物Cmax、 AUC0-t和AUC0-t采用校正值比较。参数校正值是代谢物Cmax、AUC0-t、AUC0-∞与母药相应药代动力学参数的比值)。3.上述受试者,单次喷服单硝酸异山梨酯喷雾剂5mg,于药前和药后8、15、20、30、45min、1、1.5、2、3、6、8、12、24h,肘静脉取血5mL,置于试管中(肝素抗凝),5000rpm、离心5min,取上层血浆,-20℃保存待测。GC-ECD法测定血浆中5-ISMN的浓度,采用DAS2.0.1药代动力学软件计算其药代动力学参数(t1/2、Cmax、AUC0-t和AUC0-∞),并对两组药代动力学参数进行统计学分析。4.运用SYBYL-X1.1软件,分别模拟ALDH2野生酶、ALDH2突变酶与GTN、ISDN、5-ISMN的作用过程,以GTN为参照药,分别比较两酶与ISDN、5-ISMN的结合力。结果：1.经基因分型,本课题筛选出20名健康男性受试者,其中ALDH2基因野生型(ALDH2*1/*1)14名、突变杂合型(ALDH2*1/*2)6名。2.20名受试者单次喷服硝酸异山梨酯喷雾剂3.75mg后,野生型和突变杂合型受试者体内ISDN药代动力学参数如下：t1/2分别为(0.994±0.309)h和(1.342±0.086) h, Tmax分别为(0.105±0.018)h和(0.139±0.014)h,Cmax分别为(33.611±2.065)ng/mL和(42.615±3.003)ng/mL, AUC0-t分别为(18.999±3.798)ng/mL·h和(31.188±1.427)ng/mL·h, AUC0-∞分别为(20.915-4.383)ng/mL·h和(34.576±0.898)ng/mL·h。5-ISMN药代动力学参数如下：t1/2分别为(4.554±0.858)h和(5.849±0.781)h,Tmax分别为(0.857±0.128)h和(1.083±0.204)h, Cmax分别为(63.595±4.941)ng/mL和(83.962±5.512)ng/mL, AUC0-t分别为(286.433±72.682)ng/mL·h和(482.731±100.705)ng/mL·h, AUC0-∞分别为(300.173±68.283) ng/mL·h和(519.607±96.383)ng/mL-h;2-ISMN药代动力学参数如下：tl/2分别为(3.852±0.859)h和(3.940±0.887)h,Tmax分别为(0.470±0.148)h和(0.667±0.204)h,Cmax分别为(12.321±1.325)ng/mL和(16.647±2.530)ng/mL, AUC0-t分别为(36.501±4.564)ng/mL·h和(65.941±13.547)ng/mL·h, AUC0-∞分别为(42.407±5.402)ng/mL·h和(75.098±17.972)ng/mL·h。突变杂合组与野生组相比,ISDN的t1/2和Tmax分别延长42.16%(p＜0.001)和32.38%(p＜0.001),Cmax、AUC0-t和AUCo-∞分别增加26.79%(p＜0.01)、64.16%(p＜0.01)和65.32%(p＜0.01)；5-ISMN的t1/2和Tmax分别延长28.44%(p＜0.05)和26.37%(p＜0.05),Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的校正值分别增加4.13%(p＞0.05)、2.67%(p＞0.05)和4.71%(p＞0.05)；2-ISMN的t1/2和Tmax分别延长2.28%(p＞0.05)和41.91%(p＞0.05),Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的校正值分别增加6.56%(p＞0.05)、10.05%(p＞0.05)和7.12%(p＞0.05)。3.20名受试者单次喷服单硝酸异山梨酯喷雾剂5mg后,野生型和突变杂合型受试者体内5-ISMN药代动力学参数如下：t1/2分别为(4.981±1.248)h和(5.365±0.824) h, Tmax分别为(0.821±0.117)h和(0.833±0.119)h,Cmax分别为(109.332±5.668)ng/mL和(114.108±4.529) ng/mL, AUC0-t分别为(607.626±68.854) ng/mL·h和(658.459±89.621) ng/mL·h,AUC0-∞分别为(634.798±83.358) ng/mL·h和(690.937±105.191) ng/mL·h。突变杂合组与野生组相比,t1/2和Tmax分别延长了7.72%(p＞0.05)和1.45%(p>0.05), Cmax、AUC0-t和AUC0-∞分别增加4.37%(p＞0.05),8.37%(p＞0.05)和8.84%(p＞0.05)。4. SYBYL-X1.1软件对ALDH2野生酶与GTN、ISDN、5-ISMN作用过程的打分分别为6.49、5.45和3.41,对ALDH2突变酶与GTN、ISDN、5-ISMN作用过程的打分分别为3.82、2.42和3.22。结论：研究结果表明,ALDH2基因多态性影响ISDN的人体药代动力学。喷服硝酸异山梨酯喷雾剂后,与野生组相比,突变杂合组ISDN的t1/2、Tmax, Cmax、AUC0-t和AUC0-∞都增加,且差异具有统计学意义；与野生组相比,突变杂合组5-ISMN的t1/2和Tmax都增加,且差异有统计学意义,而其它药动学校正参数间的差异无统计学意义；但两组2-ISMN校正药代动力学参数间差异无统计学意义。ALDH2基因多态性不影响5-ISMN的人体药代动力学。喷服单硝酸异山梨酯喷雾剂后,两组间5-ISMN药代动力学参数存在差异,但差异均无统计学意义。ALDH2野生酶与GTN、ISDN的结合力显著高于ALDH2突变酶与二者的结合力；但两酶与5-ISMN结合力差异不明显。