清热法对白血病细胞株及实热证急性髓系白血病原代细胞抑制作用的研究

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhenyf
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[目的]观察清热法对白血病细胞株K562、U937、HL-60及急性髓系白血病(AML)患者原代单个核细胞(MNC)在细胞形态学、细胞增殖等方面的抑制情况,为临床中医辨证的微观化提供依据,并为中西医结合治疗白血病的规范化提供参考和支持。[方法]第一部分:选用SD大鼠60只,采用中药含药血清药理学方法制备空白血清、犀角地黄汤含药血清、DA方案(AML一线化疗方案:柔红霉素+阿糖胞苷)含药血清及犀角地黄汤+DA方案含药血清。选取人红白血病细胞株K562、人单核细胞白血病细胞株U937、人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,进行细胞培养,分别采用5%、10%、15%浓度的含药血清干预细胞,并在Oh、24h、48h、72h时观察干预前后细胞形态的变化情况。利用MTT方法,观察以上四种不同浓度血清对三种不同白血病细胞株的增殖能力的影响。第二部分:选取福建医科大学附属协和医院AML(符合白血病诊断标准)患者,对其进行四诊信息的采集,采用证素辨证方法,选取积分符合热证的病例,并收集临床资料。抽取患者骨髓,采用Ficoll密度梯度离心法,提取原代单个核细胞(MNC),进行细胞培养,分别采用5%、10%、15%浓度的各组血清干预细胞,并在0h、24h、48h、72h时观察干预前后细胞形态的变化情况。利用MTT方法,观察以上三种不同浓度含药血清对AML原代单个核细胞(MNC)的增殖能力的影响。[结果]第一部分:1.与空白血清组比较,不同浓度的犀角地黄汤、DA方案和犀角地黄汤+DA方案的含药血清干预后,三种细胞,数量较少,且生长状态较差,细胞形态不规则,收缩变窄,出现细胞碎片。其中犀角地黄汤+DA方案组的细胞状态改变尤为显著,并呈现浓度依赖性,以15%浓度组细胞形态改变最明显。2.空白血清及三组含药血清对K562、U937、HL-60细胞生长均有抑制作用,对HL-60细胞的抑制作用最明显。不同浓度犀角地黄汤、DA方案的含药血清组对K562、HL-60细胞的抑制作用无显著差异,但对U937细胞的抑制作用随着浓度的升高,抑制作用增大,且呈剂量依赖性;不同浓度犀角地黄汤+DA方案含药血清组,对K562、U937细胞的抑制作用无显著差异,但对HL-60细胞的抑制作用随着浓度的升高抑制作用增大,且呈剂量依赖性。第二部分:1.与空白血清组比较,不同浓度的犀角地黄汤、DA方案、犀角地黄汤+DA方案的含药血清干预后细胞数量较少,且生长状态较差,细胞形态不规则,收缩变窄,出现细胞碎片,其中犀角地黄汤+DA方案组的细胞状态改变尤为显著,并且细胞的生长状态随浓度变化而变化,呈现浓度依赖性,15%浓度组细胞形态改变最明显。2.各组血清对12例患者的单个核细胞均有抑制作用,犀角地黄汤+DA方案含药组的抑制作用明显高于犀角地黄汤组和DA方案组;犀角地黄汤组和DA方案组的抑制作用无明显差异.同一浓度的含药血清对12例病人单个核细胞24h、48h、72h的抑制作用无统一的趋势。[结论]1.犀角地黄汤、DA方案、犀角地黄汤+DA方案等各组的含药血清对K562、U937、HL-60三种白血病细胞株及AML患者原代MNC细胞均有抑制作用,且抑制作用明显大于空白血清。2.犀角地黄汤+DA方案含药血清对K562、U937、HL-60三种白血病细胞株及AML患者原代MNC细胞的抑制作用显著大于犀角地黄汤含药血清或DA方案含药血清。3.清热法对实热证AML有疗效,证素辨证方法对AML的临床治疗能提供辨证依据。
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