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酒精性肝损伤(Alcoholic liver damage,ALD)是因饮酒过量导致的肝脏疾病,已成为危害人们健康的焦点问题之一。多糖具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性,是一类重要的生理活性物质。本研究以河蚬(Corbicula fluminea)为原料,通过酶预处理辅助三相分离法(TPP)制备河蚬多糖(PSP),利用响应面优化试验,获得最佳提取工艺参数。以酶法制备的河蚬多糖(E-PSP)为参照,对比性研究河蚬多糖的理化性质和体外抗氧化活性,确定高活性河蚬多糖。在此基础上,建立急性酒精性肝损伤小鼠模型,研究河蚬多糖对急性酒精性肝损伤的保护作用,并初步揭示其氧化应激的作用机制。主要研究结果如下:(1)利用酶预处理辅助三相分离法提取河蚬多糖(PSP)并通过单因素试验和响应面试验对其提取条件进行优化。研究表明,得到PSP最佳提取条件为:硫酸铵质量分数15.74%(w/v),叔丁醇与酶解液体积比1.4:1.0(v/v),时间30 min,温度37.10℃,此时,河蚬多糖的提取率为9.18±0.37%。(2)对比性研究PSP和E-PSP的理化性质和体外氧化活性。结果表明:与E-PSP相比,PSP的提取率(9.18%)和多糖含量(81.71%)分别提高了20.63%和1.84%,提取时间从原来的14 h极大地缩短为0.5 h,且PSP具有较低的可溶性蛋白质含量。PSP和E-PSP具有相同的单糖组成,不同的分子摩尔比;PSP和E-PSP均为蛋白聚糖且基本化学结构特征相似;PSP和E-PSP均由高分子量组分和低分子量组分构成,但PSP的低分子量组分比E-PSP的低分子量组分含量高得多。PSP的清除自由基能力和体外抗氧化活性明显高于E-PSP。(3)利用50%乙醇持续灌胃建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,综合评价PSP对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用。研究表明,与模型组相比,经PSP灌胃的小鼠肝脏指数降低,胸腺和脾脏指数有显著提高。PSP能有效降低谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性和甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活力和谷胱甘肽(GSH)的含量。(4)PSP对小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能为PSP能够调控乙醇代谢过程中的关键酶,特别是抑制了细胞色素P4502E1(CYP2E1)的表达,避免了酒精对肝脏的损伤。同时,PSP能激活血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,增强机体的抗氧化能力,缓解乙醇代谢引发的脂质过氧化作用,避免肝细胞结构遭到破坏。