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目的：探讨腺病毒E1A蛋白对细胞炎症反应及皮质激素抗炎作用的影响及其可能的机制，并进一步了解腺病毒潜伏感染对COPD发生、发展的影响，为寻找COPD有效的治疗方法打下基础。方法1.稳定表达腺病毒E1A蛋白的人肺泡上皮细胞株的构建：将已构建成功的pneo-E1A、pneo质粒转染人肺泡上皮细胞，通过G418抗性筛选和单克隆化操作最终获得稳定表达腺病毒E1A蛋白的抗性细胞克隆；用RT-PCR、western blot及免疫细胞化学等方法对E1A基因表达进行鉴定；2.腺病毒E1A基因对人肺泡上皮细胞炎症因子的影响及其机制：10ng.ml-1TNFα作用于E1A+组细胞和E1A-组细胞，分别于刺激因素作用24h后收集细胞上清，用ELISA试剂盒检测细胞因子IL-8的表达；收集细胞悬液用流式细胞术检测ICAM-1蛋白的表达；3.腺病毒E1A蛋白对不同浓度糖皮质激素抗炎作用的影响及其机制：3.1分别用终浓度10-5mol.L-1、10-6mol.L-1、10-7mol.L-1、10-8mol.L-1的DXM作用于E1A-组细胞及E1A+组细胞，检测细胞HDAC1、HDAC2的表达情况；3.2用人ELISA试剂盒、流式细胞术检测腺病毒E1A蛋白对TNF-α诱导及DXM干预下细胞因子IL-8及ICAM-1表达的影响；3.3用western blot检测腺病毒E1A蛋白对TNF-α诱导及DXM干预下HDAC1、HDAC2、GR、NF-κB的影响，用比色法检测TNF-α作用及DXM干预对HDAC活性的影响。结果1. pneo质粒及pneo-E1A质粒转染A549细胞后经G418抗性筛选，经RT-PCR检测E1A+组细胞克隆能扩增出238bp和375bp特异性片段，而E1A-组细胞无特异性条带显示；免疫组化结果显示：E1A+组细胞克隆均在细胞核内出现棕黄色细胞染色，而E1A-组细胞未见阳性染色；western blot结果显示：E1A+细胞克隆出现大小约为45～48、50～52kD E1A特异性的蛋白条带，而E1A-细胞组未检测出蛋白条带，稳定表达E1A蛋白的人肺泡上皮细胞株构建成功；2．在TNF-α作用下，E1A+组细胞和E1A-组细胞IL-8、ICAM-1蛋白表达增加，相对于E1A-组细胞，E1A+组细胞能明显上调TNF-α作用下炎症因子的表达；3.不同浓度的地塞米松均可以明显增加E1A+和E1A-组细胞HDAC1及HDAC2的蛋白表达，10-5mol.l-1地塞米松作用最强。E1A蛋白对HDAC1、HDAC2表达无明显影响。4.糖皮质激素主要通过与GR结合作用于HDAC及NF-κB发挥抗炎作用，用western blot检测TNF-α或DXM干预下E1A+和E1A-组细胞HDAC1、HDAC2、GR和NF-κB的表达情况；用比色法检测各组细胞HDAC的活性。结果显示在E1A+和E1A-组细胞，DXM能拮抗TNF-α抑制HDAC1、HDAC2蛋白表达的作用；DXM均能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化作用，腺病毒E1A蛋白对GR入核作用无影响。结论1.腺病毒E1A蛋白能够放大致炎因素诱导下炎症因子IL-8、ICAM-1的表达；2.E1A蛋白主要通过上调转录因子NF-κB的转录活性促进炎症因子的表达；3.糖皮质激素主要通过作用于GR、HDAC及NF-κB发挥抗炎作用，腺病毒E1A蛋白对其抗炎作用无影响。