论文部分内容阅读
目的（1）筛选干扰效果最佳的一对siRNA；（2）研究MafA对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响；（3）探讨MafA与FoxO1相互之间的关系。方法（1）实时荧光定量PCR（Real Time PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法分别检测siRNA干扰片段转染MIN6细胞后对MafA mRNA和蛋白的表达情况；（2）MTT法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞的增殖情况；（3）Real Time PCR法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞内FoxO1、PDX-1、insulin1和insulin2mRNA的表达；（4）Western Blot法检测MIN6细胞在不同糖浓度培养下siRNA处理前后MIN6细胞内MafA、FoxO1、PDX-1蛋白的表达。结果（1）siMafA-2组与Cy3组相比，MafA mRNA和MafA蛋白表达均显著下降（P﹤0.05），说明siMafA-2组的siRNA干扰效果最好。（2）不同糖浓度实验各亚组与对照组比较，MIN6细胞增殖均显著降低（P﹤0.05）。（3）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，FoxO1mRNA表达显著降低（P﹤0.05）。（4）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，MafA、FoxO1和PDX-1蛋白表达均显著下降（P﹤0.05）；2.5mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，FoxO1和PDX-1蛋白表达均显著增加（P﹤0.05），而MafA蛋白表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。（5）25mmol/L糖浓度下实验组与对照组比较，insulin2mRNA表达显著降低(P﹤0.05）；2.5mmol/L糖浓度下，insulin2mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）；不同糖浓度实验各亚组与对照组比较，insulin1mRNA表达差异均无统计学意义（P﹥0.05）。结论（1）siRNA-2组的siRNA使MafA基因和蛋白表达均显著下降，是本实验中理想的siRNA；（2）MafA的下调可抑制小鼠胰岛β细胞的增殖；（3）MafA下调可直接抑制小鼠insulin2mRNA表达，同时可通过FoxO1和PDX-1下调间接抑制小鼠insulin2mRNA表达；（4）MafA可调节FoxO1和PDX-1的表达。