【摘 要】
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背景:已有研究表明肿瘤与正常组织环状RNA表达谱存在较大差异,但环状RNA在胶质瘤中的调控作用及调控机制尚未明确。通过分析Song et al对27例胶质瘤和19例正常脑组织的环状RNA测序结果,发现circPTN在胶质瘤组织中高表达,但具体调控作用和调控机制有待明确。目的:明确circPTN在胶质瘤中的调控作用和具体调节机制,及其作为胶质瘤诊断生物标志物的潜能。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81272806&No.81772651）；
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背景:已有研究表明肿瘤与正常组织环状RNA表达谱存在较大差异,但环状RNA在胶质瘤中的调控作用及调控机制尚未明确。通过分析Song et al对27例胶质瘤和19例正常脑组织的环状RNA测序结果,发现circPTN在胶质瘤组织中高表达,但具体调控作用和调控机制有待明确。目的:明确circPTN在胶质瘤中的调控作用和具体调节机制,及其作为胶质瘤诊断生物标志物的潜能。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测circPTN在胶质瘤细胞/正常星形胶质细胞、胶质瘤组织/正常脑组织的表达情况,分析胶质瘤中circPTN表达与临床病理资料的相关性。RNA酶R消化实验和放线菌素D刺激实验用于比较circPTN与线性RNA的稳定性。荧光原位杂交实验用于明确circPTN的亚细胞定位。为探讨circPTN在胶质瘤细胞中的生物学功能,利用慢病毒载体稳定过表达/干扰circPTN在胶质瘤细胞中的表达,CCK-8、EdU实验及流式细胞术用于检测circPTN对增殖和细胞周期的影响。构建双荧光素酶报告质粒及RNA pull down实验检测miRNA与circPTN相互作用。利用慢病毒载体稳定过表达miR-145-5p/miR-330-5p在胶质瘤细胞中表达,并通过功能实验检测其对胶质瘤调控作用。Western blot技术检测ITGA5、SOX9、SOX2、Nestin和CD133蛋白表达。成球实验用于检测胶质瘤干细胞自我更新能力。裸鼠原位成瘤实验用于检测circPTN对胶质瘤细胞成瘤能力的影响。结果:胶质瘤细胞系中circPTN表达量较正常星形胶质细胞显著性升高（P<0.05）,胶质瘤组织中circPTN表达量较正常脑组织显著性升高（P<0.05）,circPTN的表达量与胶质瘤病理分级相关（P=0.012）,与年龄（P=0.961）、性别（P=0.091）和IDH突变（P=0.185）不相关。RNA酶R消化实验结果表明circPTN较GADPH和PTN mRNA对RNase R的耐受性更强（P<0.05）;转录抑制实验表明circPTN较PTN mRNA更稳定（P<0.05）。荧光原位杂交实验结果表明circPTN主要分布在细胞质中。上调/下调circPTN显著性促进/抑制胶质瘤细胞增殖（P<0.05）和促进/抑制胶质瘤细胞G1→S转化（P<0.05）。双荧光素酶报告实验和RNA pull down实验证实circPTN可与miR-145-5p和miR-330-5p 结合,上调 miR-145-5p/miR-330-5p 下游靶蛋白 SOX9/ITGA5 的表达。通过western blot技术及功能学实验证实circPTN可逆转miR-145-5p/miR-330-5p对PI3K/AKT信号通路抑制作用,进而发挥促胶质瘤细胞增殖的调节作用。成球实验表明circPTN可促进胶质瘤干细胞自我更新能力和上调干性指标表达（P<0.05）,而此调节作用miR-145-5p结合位点被突变后则消失。裸鼠原位成瘤实验表明上调circPTN可促进胶质瘤生长速度和缩短裸鼠生存时间。结论:circPTN 可通过吸附 miR-145-5p/miR-330-5p,逆转miR-145-5p/miR-330-5p对PI3K/AKT信号通路抑制,进而介导促进胶质瘤增殖,通过吸附miR-145-5p介导促进胶质瘤干细胞自我更新和上调干性指标。
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