绿原酸与咖啡酸体外代谢机制及相互作用研究

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绿原酸(chlorogenic acid, CHA)是由咖啡酸(caffeic acid, CA)奎尼酸(quinic acid, QA)缩合而成的羟基肉桂酸类化合物,主要分布于植物中,具有广泛的药理作用,绿原酸的生物活性越来越受到人们的重视;同时绿原酸在机体内的吸收、代谢等机制引起国内外学者的广泛关注,近年来逐渐成为国内外研究的热点。本研究内容及主要结论如下:首先,建立一种同时测定绿原酸、咖啡酸、3-羟基苯丙酸(3-hydroxyphenylpropionic acid,3-HPP)、p-香豆酸(p-coumaric acid, PA)、阿魏酸(ferulic acid, FA)和马尿酸(hippuric acid, HA)含量的高效液相色谱方法。运用Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)联合Eclipse XDB-C18(20mm×4.0mm,5μm)保护柱;以甲醇和1%的冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱;柱温:30℃;检测波长:327nm和253nm,流速:1mL/min。结果:当六种酚酸物质的进样浓度分别为:450~1.25,300~1.13,60-0.9,312-0.8,100-0.39,135-0.38(mg/L)时,在此线性范围内线性关系良好(r:0.99797-0.99992),其平均回收率:86.84-101.56%。说明该方法快速,准确,灵敏度高。其次,建立绿原酸体外代谢模型,预测绿原酸代谢过程动力学变化。运用高效液相色谱法测定发酵液中绿原酸的含量,利用SAS软件对数据进行多项式模型拟合。二次多项回归模型如下:Y1=57.33333+1.675X1+3.375X2+1.925X3-7.8666667X12-0.1X1X2-2.8X1X3-8.416667X22+4.05X2X3-13.66667X32, R2=0.981, P<0.01,模型能解释95.26%的响应值的变化,只有总变异的4.74%不能用于此模型,表明该二次多项式模型拟合度较高,具有显著性,能较准确的预测绿原酸在体外发酵中的变化趋势。然后,研究绿原酸在盲肠食糜中的代谢机制及其代谢产物动力学。运用高效液相色谱法测定绿原酸及其代谢产物的含量。结果:在盲肠食糜中约53.84%绿原酸发生水解生成咖啡酸,生成的咖啡酸中约54.2%转化生成3-羟基苯丙酸,18.59%生成p-香豆酸,15.3%生成阿魏酸。表明绿原酸及咖啡酸在盲肠食糜中以Ⅰ相代谢为主。最后,研究绿原酸、咖啡酸和3-羟基苯丙酸的相互竞争机制。通过Line weaver-Bark法,计算绿原酸和咖啡酸的动力学参数Vmax、Km,运用高效液相色谱法测定绿原酸及其代谢产物的含量,利用Origin.8软件对数据进行分析。结果:绿原酸和咖啡酸的Vmax和Km分别为:36.496mg/mL-1·h-1和0.919nol-1L-1,18.115mg/mL-1·h-1和0.96mol-1L-1说明发酵体系对绿原酸的代谢能力强于咖啡酸。通过两两混合研究可知:CA对CHA的抑制率>CHA对CA>CA对3-HPP>CHA对3-HPP>3-HPP对CA>3-HPP对CHA的抑制率。绿原酸与咖啡酸和3-羟基苯丙酸两两混合与单独发酵绿原酸和咖啡酸相比,绿原酸与咖啡酸的代谢能力均降低,代谢产物含量差别很大,其中马尿酸影响最大。
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