论文部分内容阅读
诺氟沙星为氟喹诺酮类药物，过度服用会造成细菌的耐药性。本研究以抗NFLX单抗为靶分子，采用噬菌体展示技术淘选到了NFLX模拟表位，并建立了基于NFLX模拟表位建立起了Phage-ELISA和Phage-CLEIA这两种免疫学检测方法。同时构建了一个噬菌体随机环七肽库用于小分子模拟表位的淘选。1、NFLX模拟表位淘选、鉴定及测序以抗NFLX单抗为靶分子，从噬菌体环七肽库和十二肽库中淘选得到了NFLX模拟表位，经测序后得到12种序列： NKLRLPF、 TPSRLPF、KFGFEPF、TWKNLPF、 PIHRAPF、 NTARWPF、 SPLRAPF、NWSRLPF、GPLYPGPFHTSH、 ADWHQKFQMHSR、 SRMGPENWDKWY、DHAYWPKFWGKA，其中从环七肽库中淘选的模拟表位的共有序列为X-X-X-X-X-P-F，X为任意氨基酸。2、基于NFLX模拟表位的Phage-ELISA分析法的建立以H3噬菌体粒子建立NFLX Phage-ELISA，方法的IC50值为56.1ng/mL，线性检测范围为10.0~400.0ng/mL，批内变异系数（coefficient variationsof intra-assay and inter-assay）为5.7％，批间变异系数（coefficient variation ofinter-assay）为7.3％。加标浓度为300、600、1000μg/kg，回收率范围为70.4~120.3％，变异系数为6.9~9.3％。3、基于NFLX模拟表位的Phage-CLEIA分析法的建立以H3噬菌体粒子建立NFLX Phage-CLEIA， IC50值为41.7ng/mL，线性检测范围为5.0~400.0ng/mL。批内变异系数（coefficient variations of intra-assay and inter-assay）7.2％，批间变异系数（coefficient variation of inter-assay）为9.8％。加标浓度为300、600、1000μg/kg，回收率范围为74.0~118.0％，变异系数为9.8~11.2％。4、噬菌体随机环七肽库的构建与鉴定成功构建噬菌体随机环七肽库，经鉴定，该噬菌体随机肽库的库容量为2×107，基本满足淘选要求。此外，对所构建的随机肽库进行鉴定，得出其展示的多肽中氨基酸的实际观察频数与预期的频数基本相似，表明在随机肽库中氨基酸组成上具有随机性。