CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligodexy nuc1eotides，CpG-ODN)是一类在细菌中普遍存在的以非甲基化CpG为核心的DNA序列。已有研究表明，CpG寡脱氧核普酸不仅能有效地激活天然免疫，而且能有效地激活获得性免疫，尤其是细胞免疫，且对机体毒副作用小，因此，CpG-ODN是一种高效低毒，很有潜力的新型免疫佐剂，成为免疫学研究的热点。　　 本研究在课题组前期研究工作的基础上，根据筛选出的对猪具有最佳免疫刺激活性的CpG-ODN核心序列，利用同尾酶技术巧妙地设计酶切位点并人工合成该段序列，通过多次定向克隆的方法，将其连接入pVAX1载体中，获得了一组含有不同拷贝数(1，3，4，7，10，13，19，25，49，73) CpG基序的重组质粒，分别命名为pVAX1-1, pVAX1-3, pVAX1-4, pVAX1-7, pVAX1-10, pVAX1-13, pVAX1-19,pVAX1-25，pVAX1-49，pVAX1-73。进行动物实验筛选出对猪具有最佳免疫刺激效果的重组质粒以及最佳剂量。然后通过用于质粒DNA规模化生产的大肠杆菌发酵培养基的筛选，利用重组质粒大规模纯化工艺对构建的重组质粒进行发酵提取，最后用TritonX-114方法去除动物用质粒DNA中的内毒素，使大规模、低成本生产具有免疫刺激活性并无毒副作用的CpG-ODN成为可能。　　 利用大肠杆菌高密度发酵与DNA大规模纯化工艺获得质粒pVAX1-49。为降低质粒DNA的生产成本，以标准的LB配方为参考，利用廉价的碳源，氮源代替LB培养基中的酵母粉，蛋白胨，并添加其它的无机盐，以pVAX1-49质粒转化的DH5α大肠杆菌为指示菌进行小规模摇瓶发酵，通过定时采样测定OD600并以活菌计数法辅助鉴定替代培养基的效果，通过minitable统计分析软件得到一组高性价比培养基。用该培养基培养重组大肠肝菌，绘制生长曲线，并于其对数生长中期进行42℃诱导。结果表明经42℃诱导后，质粒产量比37℃常规发酵约提高20％，为低成本、大规模生产重组质粒提供了良好的技术保障。　　 通过对经典碱裂解法抽提质粒DNA技术进行改进，并设计优化得到一种适用于大规模抽提质粒DNA的装置。本装置采用抽滤代替了经典抽提法中的离心，简化了经典质粒提取的过程，并解决了规模化提取质粒的问题，并且产量高，能从每升培养液提取大约1mg质粒，OD值为在1.75-1.9之间，达到了一定的纯度，使得大规模抽提质粒成为可能，质粒抽提过程更为简便快捷。　　 通过使用1%、2%、3%三个不同浓度TritonX-114去除重组质粒DNA中的内毒素，鲎试剂检测法确定每毫克质粒DNA中内毒素的含量，结果显示1%浓度去除内毒素效果最佳，每毫克质粒DNA中内毒素的含量为5EU，达到了一定的标准，说明使用经TritonX-114去除内毒素的质粒DNA具备良好的安全性。　　 经过以上工艺研究，形成了一个生产含CpG-ODN重组质粒的系统化工艺流程，使得基因型免疫佐剂CpG-ODN重组质粒的生产变得更加高效。