【摘 要】
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目的:构建具有感染性的人特异性肿瘤BCL-2/IgH基因的重组腺病毒5型穿梭质粒,为制备表达BCL-2/IgH基因的重组腺病毒奠定基础。方法:TRIZOL法从DoHH2细胞中提取总RNA,RT-PCR法
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目的:构建具有感染性的人特异性肿瘤BCL-2/IgH基因的重组腺病毒5型穿梭质粒,为制备表达BCL-2/IgH基因的重组腺病毒奠定基础。方法:TRIZOL法从DoHH2细胞中提取总RNA,RT-PCR法获取BCL-2/IgH融合基因,测序获得BCL-2/IgH融合基因序列,经过NCBI blast后,查找Genebank中的BCL-2基因和Ig H基因序列号,结合上面的测序结果,确定包含有BCL-2基因CDS的BCL-2/IgH基因序列,通过化学方法全基因合成得到BCL-2/IgH目的基因,将BCL-2/IgH目的基因装载到pUC57-Amp质粒,双酶切后与经过同样处理的5型腺病毒穿梭质粒pDC316连接,即构建成pDC316-BCL-2/IgH质粒;行双酶切及测序鉴定。结果:(1)本实验提取BCL-2/IgH目的基因,直接核苷酸序列分析t(14;18)连接处PCR产物,结果显示DoHH2细胞株在J6和BCL-2 MBR有一个j-bcl-2的序列。(2)本实验成功将BCL-2/IgH目的基因亚克隆到pUC57-Amp通用载体,为进一步将外源性目的基因装载到腺病毒载体做准备。(3)BCL-2/IgH目的基因成功构建入5型腺病毒穿梭质粒pDC316中,测序鉴定与Genebank中的序列一致。结论:(1)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为下一步制定表达BCL-2/IGH基因的重组腺病毒奠定基础。(2)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为研究BCL-2/IgH阳性肿瘤的基因免疫靶向治疗提供了基因传递的载体奠定基础。(3)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为套细胞淋巴瘤特异性CCND1/IgH融合基因的靶向性基因治疗研究奠定基础。
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