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目的1探索脑缺血后处理对全脑缺血大鼠海马区神经元细胞自噬表达的影响。2探索脑缺血后处理对全脑缺血大鼠海马区P38MAPK信号通路活性的影响。方法1将雄性健康清洁SD大鼠128只随机平均分为4组:假手术组(n=32)、脑缺血组(n=32)、缺血后处理组(n=32)、抑制剂组(n=32)。2脑缺血组大鼠模型采用改良的Pulsinelli四血管闭塞(4-VO)法制作,缺血时间20min;脑缺血后处理组大鼠于恢复再灌注前给予再灌注15s/缺血15s,重复3次处理;抑制剂组大鼠于后处理前30min按1mg/kg腹腔注射P38MAPK抑制剂SB2035801一次,造模后隔天一次直至大鼠被处死。3造模后48h、72h应用水迷宫记录各组大鼠在穿越平台次数和逃避潜伏期的时间,以评价大鼠在形成条件反射过程中学习、记忆能力。4造模后6h、24h、48h、72h应用光镜观察HE染色后海马区各时间点神经元细胞形态及存活神经细胞数量变化。5造模后6h、24h、48h、72h应用免疫组织化学染色法测定海马区磷酸化P38MAPK和自噬相关基因Beclin-1、LC3-II的阳性细胞表达情况;Western Blot法检测海马区磷酸化P38MAPK和自噬相关基因Beclin-1、LC3-II的蛋白含量。结果1水迷宫实验结果:与假手术组比较,脑缺血组在48h、72穿越平台次数减少,逃避潜伏期时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组比较,缺血后处理组48h、72h穿越平台次数增加,逃避潜伏期时间缩短,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组在造模后48h、72h穿越平台次数增加,逃避潜伏期时间缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。2 HE染色结果:与假手术组比较,脑缺血组大鼠海马区神经元结构损伤,存活神经元细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组组比较,缺血后处理组大鼠海马区神经元细胞结构损伤明显改善,各时间点神经细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠海马区神经元细胞结构进一步改善,各时间点存活神经元细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。3 LC3-II、Beclin1免疫组化和Westernblot结果:免疫组化:阳性细胞呈棕黄色,定位于细胞胞核。假手术组大鼠海马区神经元细胞可见少量LC3-II、Beclin1表达;与假手术组比较,脑缺血组在6h、24h、48h、72h神经元细胞LC3-II、Beclin1阳性细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组比较,缺血后处理组在6h、24h、48h、72h神经元细胞LC3-II、Beclin1阳性细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组在6h、24h、48h、72h神经元细胞LC3-II、Beclin1阳性细胞数量进一步增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Westernblot:与假手术组比较,脑缺血组LC3-II、Beclin1蛋白在恢复再灌注后6h表达开始增加,24h表达最多,48h、72h表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组比较,缺血后处理组LC3-II、Beclin1蛋白在6h、24h、48h、72h表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组LC3-II、Beclin1蛋白在6h、24h、48h、72h表达量进一步增加,差异有统计学意义(P<0.05)。4磷酸化P38MAPK免疫组化和Westernblot结果:免疫组化:阳性细胞呈棕黄色,定位于细胞胞浆和(或)胞核。假手术组大鼠海马区神经元细胞可见少量磷酸化P38MAPK阳性细胞;与假手术组比较,脑缺血组在6h、24h、48h、72h磷酸化P38MAPK阳性细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组比,缺血后处理组在6h、24h、48h、72h磷酸化P38MAPK阳性细胞数量下降,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组在6h、24h、48h、72h磷酸化P38MAPK阳性细胞数量进一步下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Westernblot:与假手术组比较,脑缺血组在恢复再灌注后6h开始出现表达增加,24h表达最多,48h、72h表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);与脑缺血组比较,缺血后处理组磷酸化P38MAPK蛋白在6h、24h、48h、72h表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组磷酸化P38MAPK蛋白在6h、24h、48h、72h表达量进一步下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1脑缺血后处理能促进自噬相关基因LC3-II和Beclin1表达上升,减轻脑缺血再灌注损伤。2脑缺血后处理能抑制P38MAPK通路活性而促进自噬相关基因LC3-II和Beclin1表达上升,发挥其内源性神经保护作用。